正交实验法优选洋参御糖丸最佳水提工艺研究

http://www.100md.com 2007年12月1日 《中华中医药学刊》 2007年第12期

     摘要：采用正交试验法对洋参御糖丸的水提工艺进行筛选研究，以芍药中芍药苷的提取率作为考查指标，采用高效液相色谱法测定含量。最佳工艺为A₃B₁C₃，所得提取液中芍药苷含量最高。

    关键词：洋参御糖丸；工艺研究；芍药苷；高效液相色谱法

    中图分类号：R284

    文献标识码：A

    文章编号：1673-7717(2007)12-2446-02

    洋参御糖丸由西洋参、天花粉、黄芪、龟板、玉竹、马梅、葛根、麦冬、山茱萸、女贞子、白芍等药组成，具有益气补肾、滋阴生津、活血通络之功。它是以民间验方为基础，结合历代著名医家治疗消渴病证的经验和大量的文献资料拟订而成，也是笔者多年临床实践的经验。本文采用正交设计法，考察加水量、煎煮时间及煎煮次数三者之间交互作用对提取效果的影响，以芍药苷含量为指标，确定洋参御糖丸中水提取部分最佳提取工艺。

    1.仪器与试剂

    岛津高效液相色谱仪(210型泵，210检测器)，N2000色谱工作站。实验用药购自哈尔滨市松茂药行，经鉴定符合《中国药典》2000年版规定。芍药苷由中国药品生物制品检定所提供。

    色谱条件：色谱柱为symrntryC₁₈(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇：水(30：70，体积比)为流动相，流速为1mLmin，检测波长为230nm，柱温为25℃。

    2.实验方法

    2.1工艺流程

    根据处方中药材的理化性质及要求，确定工艺路线，见图1。

    2.2正交设计

    一般认为水煎煮两次即可把主要有效成分提出，并可煎出所含成分的80%以上；浸泡时间为60min，可提高煎出效率。本试验根据工艺选定黄芪等药水提取的煎煮时间、加水量和煎煮次数考察的3个因素，各取3个水平，以芍药苷含量为考察指标，选用L₉³⁴正交表进行试验。见表1。

    2.3指标测定法

    2.31样品制备 根据正交试验表设计，按处方量称取芍药等干燥药材9份，每份50g，用恒温电热套按照表1分9组同时煎煮，过滤，滤液加75%乙醇50mL，醇沉24h后，上清液经0.45gμm微孔滤膜滤过后，吸取5mL用甲醇定容于50mL容量量瓶中(供测试芍药苷用)。

    2.3.2对照液制备 精密称取在120℃时减压干燥至恒重的芍药苷对照品6.96mg，加甲醇定容于10mL量瓶中，即配标准溶液。

    2.3.3标准曲线的制作 精密吸取对照品混合溶液10、20、30、40、50μL注入高效液相色谱仪。以峰面积积分值为纵坐标，对照品量为横坐标绘制标准曲线，并进行线性回归，计算标准曲线的回归方程为：Y=2×10⁶X-155153，r=019992。线性范围为：0.6960～3.4797μg。

    2.3.4稳定性试验本品经甲醇提取后，供试液分别在1、2、3、5、8h后测定，考察其稳定性，RSD为1.29%。

    2.3.5精密度试验 取处理后的同一样品，按含量测定方法重复测定5次，测定芍药苷的峰面积RSD为0.56%。

    2.3.6重现性试验 精密称取同一样品5份，按样品溶液的制备和测试方法测定，RSD为1.23%(n=5)。

    2.3.7样品测定 吸取各浓度混合溶液10μL注入高效液相色谱仪。测定峰面积，按标准曲线法计算样品水煎液中芍药苷的相应含量，结果见表2，方差分析见表3。

    3.讨论

    本研究结果是以提取物中芍药苷含量为评价指标。实验结果表明，影响本研究提取物的因素(加水量A、煎煮时间B、煎煮次数C)，统计分析知A、c因素对检测指标具有显著性影响，因素B对检测指标影响不大。工艺优选结果表明，3个因素的最佳组合为A₃B₁C₃。因此，洋参御糖丸水提正交试验的最佳工艺条件为每次加12倍量水、煎煮1h、水煎煮3次。(谢　宁　关慧波　侯淑峰　吴　颂　王小博)

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