益气养阴 活血化瘀方对实验性病毒性扩张型心肌病小鼠心肌PFP和GraB mRNA表达的影响(2)
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1.5 取材 实验结束后，无菌摘取心脏，沿左室长轴将心脏一分为二，一半置4%多聚甲醛中固定供病理切片，一半置-70℃冷冻供RT-PCR检测。
1.6 心肌病理观察 光镜下观测心肌病理变化。
1.7 检测方法 RT-PCR法检测心肌穿孔素和颗粒酶B mRNA表达。
1.8 心肌穿孔素和颗粒酶B半定量结果 PCR引物穿孔素：上游引物5’-TGCTACACTGCCACTCGGTCA-3’，下游引物5’-GCATGCTCTGTGGAGCTGTTA-3’；β-actin：上游引物5’-GCCATCCTGCGTCGTGACCTG-3’，下游引物5’-CATTTGCGGTGCACGATGGAG-3’；颗粒酶B：上游引物5’-GACTTTGTGCTGACTGCTGCTCAC-3’，下游引物5’-TTGTCCATAGGAGACGATGCCCGC-3’。扩增产物于1.5%的琼脂糖凝胶电泳鉴定，用Kodak成像分析系统扫描测定PCR产物电泳条带的密度，计算PFP和GraB产物的相对量。计算公式：相对量=产物电泳条带密度/β-actin产物电泳条带密度。
1.9 统计学分析 数据以均数±标准差表示，用SPSS软件进行t检验。
2 结 果
2.1 心肌病理改变 空白组小鼠心肌纤维排列整齐，间质血管无改变，未见心肌细胞变性、坏死；模型组小鼠心肌纤维排列紊乱、断裂，心肌细胞肥大，空泡变性，血管充血出血，少量炎细胞浸润，间质纤维化明显；中药低剂量组小鼠心肌纤维排列较紊乱 ......
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