广东凉茶对热休克大鼠肝组织HSP70基因表达的影响(2)
 |
1.5.2PCR反应 HSP70上游引物：5'-ATCACCGTGCCCGCCTACTT-3’，下游引物：5'-CGGTTGTCGAAGTCCTCCCC-3’，扩增片段长度为277bp；β-actin上游引物：5’-ACCCCTCAACCCCAAAATCA-3’，下游引物为5’-AGGAAGGCTGGAAAATGGCTT-3’，扩增片段长度为473bp。PCR扩增反应条件：96℃ 11min，1个循环；96℃ 45s，60℃ 45s，72℃ 1min，30个循环；72℃ 10min结束反应。取逆转录后cDNA 5μL在100μL PCR体系中扩增，体系含10×PCR 缓冲液5μL、25mmol/L MgC12 2μL、10mmol/L dNTP 1μL、10pmol/μL，HSP70上下游引物各2.5μL,3pmol/μL，β-actin上下游引物各2.5μL,Taq酶0.5μL,轻质石蜡油 50μL，反应获得RT- PCR产物。
1.5.3RT-PCR产物半定量检测 取8μL扩增产物行2%琼脂糖凝胶电泳，采用VL凝胶成像系统摄像，Labworks 4.6分析软件获得各电泳条带的光密度值，重复3次，取均值。以HSP70/β-actin光密度值反映HSP70mRNA的表达水平。
, 百拇医药
1.6 统计学处理
实验结果以均数±标准差(±s)表示，应用SPSS11.5软件进行数据分析，经方差齐性检验后，各组两两比较采用单因素方差分析。
2 结 果
从图1可以看出，HSP70在各组大鼠肝组织中均有不同程度表达。与正常对照组相比，热休克模型组HSP70水平表达增高，有显著性差异(P0.05)。结果表明邓老凉茶能够抑制热休克大鼠肝脏HSP70的表达，能够对抗热休克因素引起的HSP70表达增加(见表1)。
3 讨 论
广东凉茶是颇具广东特色的夏季清凉饮料，目前，凉茶已入选国家级非物质文化遗产名录，得到世界范围内的保护，著名品牌有王老吉凉茶、夏桑菊凉茶、邓老凉茶、黄振龙凉茶等。如今的凉茶已从一种清热祛湿的治病药茶演变为倍受人们喜爱的清凉饮品。但凉茶实际并不是一种简单的清凉饮料，而是根据中医辨证原理、组方原则和药物功效形成的一种特殊饮品。有些品种的凉茶(如邓老凉茶)，所含的中药成分偏重于治疗保健作用，甚至可以作为OTC药物使用。凉茶具有许多功效诸如清热泻火、祛湿解毒、宁心安神等，对于表现有热、火、湿、毒等证候的人群而言，凉茶就起治疗作用。由于凉茶介乎于药品和食品之间，安全性又好，因此越来越受到欢迎，凉茶的发展也就突飞猛进。与此相应，对凉茶的作用机理研究、凉茶的适应症和非适应症、凉茶是否具有副作用等问题也越来越引起关注。
, 百拇医药
现代研究表明，机体组织或细胞在环境温度升高等温热刺激下能够发生热休克反应，产生热应激蛋白——热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)。其中，HSP70是一组重要的细胞保护蛋白，作为“分子伴侣”，参与新合成蛋白质的折叠、装配和运输，防止蛋白质变性和聚集，帮助损伤蛋白质的再折叠或降解等[2-3]。研究表明，机体经热应激处理后HSP70大量表达，其表达水平与热应激强度和持续时间有关[4-5]。本研究选取广东凉茶的著名品牌王老吉凉茶、夏桑菊凉茶、邓老凉茶，通过观察其对热应激处理大鼠体温改变及热应激诱导蛋白HSP70表达的影响，探讨广东凉茶进行热保护作用的机理，对于干预和提高机体对高温耐受的能力具有十分重要的价值。
本研究结果显示热休克模型组与正常对照组相比，HSP70表达增高，有显著性差异(P0.05)，提示邓老凉茶能够通过抑制热休克大鼠肝脏HSP70的表达，其清热降火作用能够对抗热应激因素所导致的HSP70表达增加，使机体趋于正常状态。
, 百拇医药
参考文献
[1] 冼剑民,姚杭.浅析广东的凉茶文化及其流变[J].饮食文化研究，2005,16(4):100-107.
[2] Gething MJ.Protein folding in the cell[J].Nature，1992，355：33.
[3] Hightower LE.Heat shockstress proteins，chaperones，and proteotoxicity [J].Cell，1991，66：191-197.
[4] 何建宏，李玉民，巩爱霞. 经高温处理后大鼠肝中热休克蛋白7O的表达[J].中国普通外科杂志.2004,13(6):432.
[5] 郭玫，张顺利，张文学.热休克反应中小鼠心脏HSP70表达的免疫组织化学研究[J].动物学杂志，2001,36(2):15-18., 百拇医药(胡晨霞 王静元 唐 远)