高效液相色谱法测定心血宁片中葛根素的含量(1)

http://www.100md.com 2008年11月1日 《中华中医药学刊》 2008年第11期

     摘 要：目的：建立心血宁片中葛根素的含量测定方法。方法：高效液相色谱法(HPLC)。色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C₁₈(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(23∶77∶0.2)；检测波长：250nm；流速：1.0mL•min^-1；柱温：25℃。结果：葛根素在25.05～250.5ng范围内线性关系良好，回归方程为Y＝4.458×103X(r＝0.9998)，平均加样回收率为99.44%，RSD=2.0%(n=5)。结论：本方法操作简便、准确快速、重现性好，可用于心血宁片的质量控制。

    关键词：心血宁片；葛根素；高效液相色谱法；含量测定中图分类号：R284.2文献标识码：B

    文章编号：1673-7717(2008)11-2515-03

    Quantitative Determination of Puerarin in XinXuening Tablets by HPLC

    ZHANG Chunxia,ZHOU Aizhen,advisor:YIN Hua

    (College of Pharmacy,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,Zhejiang,China)

    Abstract:Objective：To establish an HPLC method to determinate the content of puerarin in Xinxuening tablets.Methods:HPLC：The analysis was carried on acolumn of zorbax eclipse XDB-C₁₈(4.6mm×150mm，5μm)at 25℃；methanol-water-H3PO4(23∶77∶0.2)as mobile phase；the flow rate was 1.0mL•min^-1：the detection wavelength was 250nm.Results：A good linearity can be found in the range of 25.05~250.5ng.The average recovery rate was 99.44%，RSD：2.0%(n=5).Conclusion：The method is simple，rapid，accurate and reliable.Itcan be used to control the quality of Xinxuening tablets.

    Key words:Xinxuening tablets；puerarin；HPLC；quantitative determination

    心血宁片为临床常用中成药，由葛根、山楂提取物制成，具有活血化瘀、通络止痛之功效，用于心血瘀阻、瘀阻脑络引起的胸痹、眩晕，以及冠心病、高血压、高血脂等症^[1]。葛根为其君药，现代药理研究表明葛根具有扩张冠状动脉、增加冠状血流量的作用，其主要有效成分为葛根素、5，7，4’-三羟基异黄酮、大豆苷等黄酮类成分^[2-3]。为了有效控制心血宁片的制剂质量，本文建立了心血宁片中葛根素的高效液相色谱含量测定方法，该方法操作简便，结果可靠，重现性好，可用于心血宁片的质量控制。

    1 仪器与试剂

    仪器：Agilent 1100 Series高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；十万分之一电子分析天平(德国塞多利斯)；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；PL5124型纯水机；DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；PHS-3TC(0.01级)精密数显酸度计(上海天达仪器有限公司)。药品和试剂：葛根素对照品(中国药品生物制品鉴定所，供含量测定用，批号：752-200110)；甲醇(色谱纯，MERCK公司)；水为过0.2μm滤膜的重蒸水；其余试剂均为分析纯。心血宁片(批号：031101，040322，050103)。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件及系统适应性试验

    色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C₁₈(4.6mm×150 mm，5μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(23∶77∶0.2)；检测波长：250nm；流速：1.0mL•min^-1；进样量5μL。本实验条件下，葛根素与相邻组分分离完全(R≥1.5)，理论塔板数以葛根素峰计不低于4000。

    2.2 样品制备

    2.2.1 对照品溶液的制备

    精密称取葛根素对照品10.02mg置于50mL量瓶中，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.2004mg•mL^-1的葛根素对照品储备溶液；精密吸取此储备液1.25mL置于5mL量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为50.10μg•mL^-1的葛根素对照品溶液。

    2.2.2 供试品溶液的制备

    取干燥至恒重的心血宁片内容物约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇溶液25mL，称定重量，60℃超声提取20min，冷却至室温后，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液1mL至25mL量瓶中，以30%乙醇溶液稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

    2.2.3 缺葛根阴性对照溶液的制备

    按处方比例称取除葛根的其他药味，依照心血宁片的制备工艺制成缺葛根的心血宁阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成缺葛根的阴性对照溶液。

    2.3 空白试验

    取对照品溶液、供试品溶液及缺葛根的阴性对照溶液各5μL在上述色谱条件下分别进样，得到相应的色谱图(图1-A、B、C)。结果表明：葛根素对照品溶液和心血宁供试品溶液的色谱图中均在保留时间为9.3min处出现葛根素的色谱峰；而缺葛根的阴性对照溶液色谱图在此保留时间处无色谱峰，说明制剂中其他成分对葛根素测定不产生干扰。见图1。

    精密吸取50.10μg•mL^-1葛根素对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.6、2mL，分别置于2mL量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为5.01、10.02、20.04、40.08、50.1μg•mL^-1的葛根素对照品溶液，在上述色谱条件下，分别进样5μL进行测定，以葛根素对照品的进样量X(ng)为横坐标，葛根素峰面积积分值Y为纵坐标进行线性回归，回归方程为：Y=4.458×103X(r=0.9998)，表明葛根素在25.05～250.5ng范围内进样量与峰面积之间呈良好的线性关系。

    2.5 精密度试验

    精密吸取20.04μg•mL^-1葛根素对照品溶液在上述色谱条件下重复进样6次，每次5μL，葛根素峰面积的RSD为0.65%，表明精密度良好。

    2.6 稳定性实验

    取新配制的心血宁供试品溶液(批号为031101)，于0、2、4、6、8、12、24h分别进样5μL测定峰面积，结果供试品溶液葛根素峰面积的RSD为0.23%，表明心血宁供试品溶液在24h内稳定。(张春霞　周爱珍　尹　华)

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