黄芪和苦参不同配伍比例对小鼠免疫功能影响的研究
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摘 要:目的:通过黄芪、苦参的配伍比例(以质量比计)变化对小鼠的免疫功能的影响研究来探讨黄芪和苦参配伍增强机体免疫力的最佳配伍比例。方法:利用ELISA法检测血清中的白介素2(IL-2)水平,微量溶血分光光度法检测血清溶血素的生成,显微镜下观察腹腔巨噬细胞吞噬功能,测定黄芪和苦参不同配伍比例对小鼠免疫功能影响。结果:黄芪和苦参以1∶2配伍比例能够促进血清中IL-2的水平和血清溶血素的生成以及增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能;结论:黄芪和苦参以1∶2配伍比例为最佳增强免疫力配伍比例。
关键词:黄芪;苦参;ELISA;溶血素;吞噬功能;免疫功能
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)01-0208-02
Research on Effects of Mice’s Immune Function of Sophora
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Flavescens Different Proportion Compatibility of Ait and Astragalus
SHAN Yu1,2,ZHANG Zhenqiu1,DONG Xiaoqian1,LI he1
(1.Pharmacy College,Liaoning University of TCM,Dalian 116600,Liaoning,China
2.Petrochemical Hospital of Liaohe Oilfield,Panjin 124022,Liaoning,China)
Abstract:Objective:To discuss the best proportion compatibility of Sophora flavescens Ait and astragalus for strengthening body immune function.Methods:Checking the IL-2 level in blood serum by ELISA method;Checking the generat ion of serum hemolys in by micro hemolysis sepctrophotometry;observing phagocytosis of Peritoneal Macrophages by microscope;And determine the proportion compatibility which af.fects the immune function of mice.Results:the proportion compatibility ofAit and astragalus is 1∶2 Can promote the IL-2 level in blood serum
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and the generation of serum hemolysin and it can even reinforce the function of Peritoneal Macrophages.Conclusion:The best proportion compatibility of Sophora flavescens the proportion compatibility of Ait and astragalus is 1∶2 to strengthen the immune function.
Key words:Sophora flavescens Ait;astragalus;ELISA:hemolysin:phagocytosis;immune function
黄芪、苦参单味药均能提高机体免疫力,但是对黄芪和苦参组成的方剂能增强小鼠免疫力研究尚少,特别是还没有不同比例的配伍对增强小鼠免疫力的研究还未见报道。本文选用黄芪和苦参不同配伍比例观察对小鼠的血清中IL-2水平、血清血容素的生成及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,为黄芪和苦参配伍组成方剂的临床应用提供理论依据。
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1 仪器与试药
1.1 仪器
酶联免疫测定仪(奥地利安图公司2010型);油镜(OLYMPUS CH型)。
1.2 动物
健康昆明种小鼠,体重18~22g,6~8周龄,雌雄各半,购自沈阳药科大学试验动物中心。
1.3 试药
黄芪、苦参分别配制成1∶1,1∶2,1∶3,1∶4,1∶5,2∶1,3∶1,4∶1,5∶1;氢化可的松(Hc赤峰蒙欣药业有限公司批号:061003);0.9%生理盐水(NaCI);小鼠IL-2试剂盒(ADLITTERAM DIAGNOSTIC LABORATORIES);2%绵羊红细胞;1%鸡血红细胞;5%可溶性淀粉;阳性对照药补中益气丸(药都制药集团股份有限公司产批号:060601)。
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2 方法和结果
2.1 ELISA法检测血清中的白介素2(IL-2)水平
2.1.1 免疫功能低下模型制备[1] 取小鼠88只(雌雄各半),随机分为1l组:即模型对照组、阳性对照组、1∶1组、1∶2组、1∶3组、1∶4组、1∶5组、2∶1组、3∶1组、4∶1组、5∶1组。各组小鼠每天肌肉注射氢化可的松(Hc)0.2mL/只,连续10日,观察小鼠以皮毛无光泽、活动度降低、尾部晦黯等,表明造模成功。
2.1.2 给药方法 各组均在试验第10日开始用药(给药量为生药量),每天1次,连续10日。
2.1.3 小鼠IL-2水平的测定 采用ELISA法。
2.1.4 统计学分析 检测结果以均数±标准差表示(±s),组间比较用t检验。
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2.1.5 结果 实验结果见表1。
2.2 微量溶血分光光度法检测血清溶血素的生成[2]
2.2.1 方法 取小鼠88只(雌雄各半),随机分成11组,即模型对照组、阳性对照组、1∶1组、1∶2组、1∶3组、1∶4组、1∶5组、2∶1组、3∶1组、4∶1组、5∶1组,连续灌胃给药7天(给药量为生药量),给药第3天每只鼠腹腔注射2%的绵羊血红细胞悬液0.2mL,于第7天给药后1h将各鼠摘眼球取血1mL,离心,取10μL血清置已加入生理盐水的试管中,用生理盐水稀释500倍,将稀释后血清加入96孔板中,每孔0.1mL,继而加入等量的10%SRBC 0.05mL和豚鼠血清(1∶20稀释)0.1mL,试验孔总体积为0.3mL。置37℃温箱温育30min,离心(2000r/min)10min,取上清液200μL放入另一96孔板内,置酶标仪(A415)测定。
2.2.2 结果 实验结果见表1。
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半数溶血HC50=样品吸收度值/SRBC半数血时的吸收度值×稀释倍数
2.3 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[3]
2.3.1 方法 取小鼠88只(雌雄各半),随机分成11组,即模型组、阳性对照组、1∶1组、1∶2组、1∶3组、1∶4组、1∶5组、2∶1组、3∶1组、4∶1组、5∶1组,连续灌胃给药
7天(给药量为生药量),给药第3天每只鼠腹腔注射5%的可溶性淀粉1mL,于第7天给药
后每只鼠腹腔注射1%鸡血红细胞,1～1.5h后将小鼠断椎处死,固定在桌面上,腹部消毒后腹腔注射1mL生理盐水,按摩腹腔,在腹部中央将皮肤剪一小口,上下撕开,暴露腹膜,轻提腹膜剪一小口,吸取约0.2mL。腹腔液滴于载玻片上,水平涂片,将玻片放在湿盒内,置37℃温箱中孵育30min,取出,用生理盐水淋洗,自然晾干后,用Giemsa-wright染液染色5min,在用生理盐水淋洗,晾干后,油镜下观察,计数200个吞噬细胞中吞噬的鸡血红细胞数,按下式计算。
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吞噬指数=被吞噬鸡血红细胞数/巨噬细胞数
2.3.2 结果
实验结果见表1。
3 讨 论
3.1 实验结果表明
黄芪和苦参1∶2、1∶5、4∶1的配伍比例能增强血清中的IL-2水平,以1∶2的配伍比例为最佳。
黄芪和苦参1∶1、1∶2、1∶4、1∶5、2∶1、4∶1的配伍比例能增强血清溶血素的生成,以1∶2的配伍比例为最佳。
黄芪和苦参1∶1、1∶2、1∶5、4∶1的配伍比例能增强腹腔巨噬细胞吞噬功能,以1∶2的配伍比例为最佳。
3.2 黄芪和苦参依据单味药材的有效成分而经常被临床在一起配伍使用 主要用于治疗病毒性心肌炎[3]
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病毒性心肌炎是由于病毒感染和机体免疫功能低下所致。从增强血清中的IL-2水平、血清溶血素的生成、腹腔巨噬细胞吞噬功能即从细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫3个方面说明黄芪和苦参1∶2配伍比例为最佳配伍比例。为黄芪和苦参最佳配伍比例治疗病毒性心肌炎提供一些理论依据。
参考文献
[1] 颜培宇,于晓红.黄芪多糖注射液对免疫功能低下小鼠血清IL-4和IFN-4影响的试验
研究[J].内蒙古中医药,2007(10):35-36.
[2] 倪峰,洪华炜,翁华春,等.木姜子根多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床,2001,17(5):15.
[3] 刘媛媛,张振秋.苦芪甘颗粒对小鼠免疫功能的影响[J].中华中医药学刊,2007,25(5):1012-1013., 百拇医药(单 玉 张振秋 董晓茜 李 贺)