活骨胶囊的微生物限度检查方法验证
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摘 要:目的:通过验证试验寻求活骨胶囊的微生物限度检查方法。方法:采用2005年版中国药典规定方法。结果:活骨胶囊可采用常规的平皿法进行微生物限度检查。结论:本法不会对活骨胶囊可能存在的各类微生物产生抑制作用,可用平皿法进行活骨胶囊的微生物限度检查。
关键词:活骨胶囊;微生物限度;平皿法;验证
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)04-0840-02
Living Bone Capsule Microbial Limit Method Validation
YU Jianchun,LUO Xianghua
(Pok Oi Hospital, Taizhou City, Taizhou 318050,Zhejiang,China)
Abstract:Objective:validation tests to find the limits of micro-organisms living bone capsule inspection methods.Methods:The 2005 edition of Chinese Pharmacopoeia method. Results: Living bone capsule method can be used conventional plate microbial limit tests.Conclusion:This method does not exist in the living bone capsule can produce various types of micro-organisms inhibition can be used plate method bone capsule of living microbial limit.
Key words:bone capsule;living microbial limit;plate method;validation
收稿日期:2009-11-07
基金项目:浙江省食品药品监督管理局资助项目(Z20050262)
作者简介:禹建春(1969-),男,河南泌阳人,主管中药师,主要从事中药制剂的研发与生产。
活骨胶囊是台州市股骨头坏死研究所、台州市博爱医院制剂室共同研制的中药制剂,具有活血化瘀,瘀祛新生,祛风止痛,强筋健骨的作用,用于股骨头坏死与瘀血症。按照2005年版药典要求,当建立药品的微生物限度检查方法时,应对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证,以确认所采用的方法适用于该药品。为了保证试验结果的重现性,笔者随机抽取了3批活骨胶囊,用相应试验菌进行了3次独立的平行试验[1],结果显示不会对活骨胶囊可能存在的各类微生物产生抑制作用,可用常规平皿法进行活骨胶囊的微生物限度检查。
1试验材料
1.1活骨胶囊
由台州市博爱医院制剂室提供。
1.2试验用菌种
大肠埃希菌CMCC(B)44102;金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003;绿脓假单孢菌CMCC(B)10104;枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501;白色念珠菌CMCC(F)98001;黑曲酶CMCC(B)98003。以上菌种均有浙江省药品检验所提供,采用中国药典2005年版提供的方法制备菌液。
1.3培养基
营养肉汤培养基;营养琼脂培养基;玫瑰红钠琼脂培养基;胆盐乳糖培养基;胆盐乳糖发酵培养基;曙红亚甲蓝琼脂培养基;溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基;甘露醇氯化钠琼脂培养基;改良马丁培养基;改良马丁琼脂培养基。以上培养基由中国生物制品检定所提供。
1.4器具
培养皿;移液管;研钵;试管;三角瓶等。
2试验方法
2.1试液配制
2.1.1 稀释液配制按照药典规定方法[1]配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓释液、0.9%无菌氯化钠溶液,备用。
2.1.2验证菌液制备 按药典规定方法[1]制备50~100cfu•mL-1的金黄色葡萄球菌菌悬液、大肠埃希菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液、黑曲霉孢子悬液。
2.2平皿菌落计数方法验证试验
2.2.1供试液
称取活骨胶囊10.0g,倒至装有90mL pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓释液的三角瓶中,于45℃水浴10min,充分摇匀即为供试液。
2.2.2实验组
取上述供试液1.0mL注入平皿中,加入1.0mL含(50~100cfu)试验菌,应避免接触到供试液,立即倾入对应的于45℃水浴保温的琼脂培养基,并摇匀,置规定的温度下培养。
2.2.3菌液组
取试验菌液1.0mL(50~100cfu.),测定其菌数。
2.2.4供试品对照组
取供试液1.0mL,测定其本底菌数。
2.2.5稀释剂对照组
取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓释液1.0mL,替代供试品,按2.2.2方法测定菌数。
2.2.6回收率计算
实验组的菌回收率(%)=
试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数菌液组的平均菌落×100%
稀释剂对照组的菌回收率(%)=
稀释剂对照组的平均菌落数菌液组的平均菌落数×100%
2.2.7判定标准实验组和稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%[1]。
2.2.8试验结果 实验组和稀释剂对照组的菌落回收率均大于70%,见表1。
表1试验组和稀释剂对照组的菌落回收率结果
菌种名称供试品批号试验组菌稀释剂对照组菌回收率(%)
大肠埃希菌06100493.299.4
CMCC(B)4410206100594.1101.2
06100694.398.8
06100490.9100.0
金黄色葡萄球菌06100588.899.4
CMCC(B)2600306100695.3100.0
06100492.599.4
枯草芽孢杆菌06100590.699.4
CMCC(B)6350106100688.7101.1
06100486.5100.6
铜绿假单胞菌06100588.8100.0
CMCC(B)1010406100691.498.8
06100491.5100.8
白色念珠菌06100595.7100.6
CMCC(B)9800106100695.3100.0
06100495.7100.6
黑曲霉CMCC06100594.8100.6
(F)9800306100697.0100.6
2.3控制菌检查方法验证
对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠菌群等控制菌检查方法,按2005年版中国药典规定方法逐一进行验证 ......
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