旺拉格-37味丸对亚急性衰老小鼠自主活动记忆力\游泳耐力\SOD的影响(2)

http://www.100md.com 2011年4月1日 布仁巴图 韩志强 巴图德力根 高玉峰 青玉

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    参见附件(4776KB，7页)。

     1 实验材料

    1.1 实验动物

    ICR小鼠，18～22g，雌雄各半，由吉林大学实验动物中心购。许可证号：SCXK-(吉)2007-0003。

    1.2 仪器

    ZZ-6小鼠自主活动仪、DT-200小鼠跳台仪，成都泰盟科技有限公司；BG10-3A高速冷冻离心机，北京时代北利离心机有限公司；755B紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；MT-200水迷宫视频跟踪系统,成都泰盟科技有限公司等。

    1.3 药物与试剂

    旺拉格-37，批号：哲卫准字9804-78，由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂部提供；抗衰复春片，国药准字：Z21020692,批号：081002，由辽宁华鑫药业有限公司生产；D-半乳糖，批号：F20080721，由国药集团化学试剂有限公司购。SOD试剂盒，批号：20090211，南京建成生物工程研究所提供。冰醋酸，批号200871,沈阳东兴化学试剂厂生产。

    2 实验方法与结果

    2.1 动物分组与给药

    实验用ICR小鼠40只，雌雄各半，按体重随机分为4组，即空白对照组、模型组、旺拉格-37组、抗衰复春片组。旺拉格-37组以3g/kg(按成人体重60kg，日2次口服换算)、抗衰复春片组0.7g/kg(按成人体重60kg，日2次口服换算)、均0.2mL/10g灌胃给药，模型组与对照组灌胃同体积的蒸馏水，每日1次，连续灌胃49天。给药的同时模型组和给药组小鼠每天颈背部皮下注射5%D-半乳糖，0.5mL/只，连续注射49天。空白对照组皮下注射等量的生理盐水。注射均按无菌操作要求。造模给药42天后进行各项指标的测定。

    2.2 动物行为观察

    2.2.1 旺拉格-37对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠自主活动的影响【sup】 [3]【/sup】 造模给药第42天用ZZ-6小鼠自主活动仪观察自主活动次数。给药1h后先令小鼠适应环境3min，随后记录小鼠在10min内的活动次数和站立次数，为避免时辰的影响，各组间平行操作，观察时间为10h～12h，结果见表1。

    表1 旺拉格-37对小鼠亚急性衰老模型自主活动

    的影响(±s)

    注：与模型组比较，**P<0.05。

    从表1结果可见模型组小鼠站立次数与空白组比较明显下降，但与空白组比较没有显著性差异，活动次数相近。抗衰复春片组、旺拉格-37组站立次数和活动次数与模型组比较均明显增多，有显著性差异P<0.05。

    2.2.2 旺拉格-37对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠学习记忆能力的影响【sup】[4]【/sup】 造模给药第43天采DT-200小鼠跳台仪测量小鼠学习记忆能力。给药1h后将第一批4只小鼠分别放入跳台仪的4个格子内，先适应环境3min，然后通电，小鼠受电击后，多次跳上跳台，逃避电击。跳下时以小鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应，训练5min，并记录5min内触电次数，24h后重新测试。测试时先将小鼠放在跳台上，同时按下开始键，记录小鼠第1次跳下时间(触电潜伏期)及小鼠5min内跳下次数(即错误次数)，结果见表2。再过24h再次给与电刺激，巩固学习。经72h后按上述方法重新测试潜伏期和错误次数，观察各组的遗忘程度，结果见表3。

    表2 旺拉格-37对小鼠亚急性衰老模型学习记忆

    的影响(±s)

    注：与模型组比较，**P<0.05。

    从表2结果可见与空白对照组比较模型组表现潜伏期明显缩短，错误次数增多，P<0.05,与模型组比较抗衰复春片组和旺拉格-37组可使潜伏期延长，错误次数减少P<0.05。

    表3 旺拉格-37对小鼠亚急性衰老模型学习记忆

    遗忘的影响(±s)

    注：与模型组比较，**P<0.05。

    从表3结果可见与空白对照组比较模型组表现潜伏期明显缩短，错误次数增多，P<0.05；与模型组比较抗衰复春片组和旺拉格-37组可使潜伏期延长，错误次数减少，P<0.05。

    2.2.3 旺拉格-37对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠游泳能力的影响【sup】[3]【/sup】 第49天给药1h后，小鼠尾根部负荷7%体重的铅丝，置于水迷宫视频跟踪系统的圆筒直径80cm，水深20cm，水温25℃水中游泳，观察小鼠游泳至力竭，以沉入水下5s不能上浮为准，该时间为小鼠的游泳时间，结果见表4。

    表4 旺拉格-37对小鼠亚急性衰老模型游泳时间

    的影响(±s)

    注：与模型组比较，**P<0.05。

    从表5结果可见与空白对照组比较模型组表现游泳时间明显缩短，P<0.05；与模型组比较旺拉格-37组游泳时间明显延长，P<0.05。

    2.3 旺拉格-37对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠SOD活性的影响【sup】[3]【/sup】

    完成上述实验，造模给药后第50天，小鼠断头处死，采集血液，离心(3000r/min,10min)制备血清，按黄嘌呤氧化酶法试剂盒要求依次加入试剂一、样品、试剂二、试剂三、试剂四、用旋涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40min，加入显色剂混匀，室温放置10min，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色，测定吸光度，计算SOD活性，结果见表5。

    表5 旺拉格-37对小鼠亚急性衰老模型SOD活性

    的影响(±s)

    注：与模型组比较，**P<0.05。

    从表5结果可见与空白对照组比较模型组SOD活性明显下降，P<0.05；与模型组比较抗衰复春片组和旺拉格-37组SOD活性明显升高，P<0.05。

    3 讨 论

    衰老是生命过程中正常而又复杂的生理现象，是机体内各种生化反应的综合过程。随着年龄的增长，自由基产生增多，而清除自由基的相关酶活性下降以及机体免疫功能下降等多种因素均是机体发生衰老的重要机理。D-半乳糖致衰老模型是基于衰老的代谢学说而复制的一种衰老模型，具有与自然衰老相似的自由基代谢紊乱特征，其衰老反应接近或相当于自然衰老。小鼠长期注射D-半乳糖，引起全身代谢紊乱，以致产生各器官、系统功能衰退。表现为记忆力减退，免疫器官退化，由于自由基堆积，细胞膜脂质受损，过氧化脂质、脂褐质增高，B型单胺氧化酶活性增高。这些变化均与老龄小鼠相似【sup】[5-6]【/sup】。

    蒙医认为人体是有三根七素构成，它们维持着人体的生命活动。因某种原因失去了相互依赖，相互促进、相互影响的平衡关系而导致发病。衰老是随着人的年龄增长，三根失调，热能衰败，巴达干赫依增多，消化力减弱，食物不消，不能充分分解成精华和糟粕，从而引起一系列“糟粕不消化症”和“精华不消化症”影响全身脏器功能。赫依具有维持生命活动推进血液运行，司理呼吸、分解食物、输送精华与糟粕，增强体力，使五官功能正常及意识清楚。赫依偏盛出现皮肤失润变黑如裂状、恶寒战栗、疲乏无力、腹胀肠鸣、大便秘结、多语、头昏目眩、睡眠不安、神志不清、全身无力、少语、心神不安、神志不清等症状。巴达干有滋生和调节体液，是身体、舌、思维活动稳定，辅助消化，滋养正精 ......

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