超微血府逐瘀汤对急性心肌缺血大鼠缺血心肌血管新生及bFGF\ANG-1表达的影响(2)
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参见附件(4565KB，7页)。
1.2.4 心肌梗死边缘区bFGF、ANG-1免疫组化检测 采用免疫组织化学法检测bFGF、ANG-1在缺血心肌中的蛋白表达情况。操作步骤、阳性结果判断见1.2.3。通过Motic B5显微摄像系统采集图像，用MIAS医学图象分析系统进行计算机图像分析，每张切片随机选取5个高倍视野(×400)，取每个视野“阳性区平均光密度”的均数作为本只大鼠的光密度值。
1.3 统计学处理
全部数据均用单因素方差分析，在SPSS 16.0统计软件中进行处理，统计结果均用均数±标准差(±s)表示。
2 结 果
2.1 超微血府逐瘀汤对大鼠缺血心肌内皮细胞数、MVD的影响
模型组与假手术组比较，内皮细胞数和MVD明显增加(P﹤0.05)超微血府逐瘀汤组、麝香保心丸组与模型组相比较，大鼠缺血心肌内皮细胞数、MVD均明显增加(P﹤0.01或P﹤0.05)超微血府逐瘀汤组、麝香保心丸组与假手术组比较，内皮细胞数和MVD明显增加(P<0.01)；超微血府逐瘀汤组与麝香保心丸组比较，大鼠缺血心肌内皮细胞数、MVD均明显增加(P<0.05)。结果见表1。
表1 超微血府逐瘀汤对大鼠缺血心肌
内皮细胞数 MVD的影响(±s)
注：与模型组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01；与假手术组比较,★P<0.05，★★P<0.01；与麝香保心丸组比较，△P<0.05，△△P<0.01。
2.2 超微血府逐瘀汤对大鼠缺血心肌bFGF蛋白表达的影响
模型组与假手术组比较，bFGF蛋白表达明显升高(P﹤0.05)超微血府逐瘀汤组、麝香保心丸组与模型组相比较，bFGF蛋白表达明显增高(P﹤0.01或P﹤0.05)超微血府逐瘀汤组、麝香保心丸组与假手术组比较，bFGF蛋白表达明显升高(P﹤0.01)；超微血府逐瘀汤组和麝香保心丸组比较，bFGF蛋白表达明显升高，差异显著(P﹤0.01)。见表2。
表2 超微血府逐瘀汤对大鼠缺血心肌
bFGF蛋白表达的影响(±s)
注：与模型组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01；与假手术组比较,★P<0.05，★★P<0.01；与麝香保心丸组比较，△P<0.05，△△P<0.01。
表3 超微血府逐瘀汤对大鼠缺血心肌
ANG-1蛋白表达的影响(±s)
注：与模型组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01；与假手术组比较,★P<0.05，★★P<0.01；与麝香保心丸组比较，△P<0.05，△△P<0.01。
2.3 超微血府逐瘀汤对大鼠缺血心肌ANG-1蛋白表达的影响
模型组与假手术组比较，ANG-1蛋白表达明显升高(P﹤0.05)超微血府逐瘀汤组、麝香保心丸组与模型组相比较，ANG-1蛋白表达明显增高(P﹤0.01或P﹤0.05)超微血府逐瘀汤组、麝香保心丸组与假手术组比较，ANG-1蛋白表达明显升高(P﹤0.01)；超微血府逐瘀汤组和麝香保心丸组比较，ANG-1蛋白表达显著升高，差异明显(P﹤0.05)。见表3。
3 讨 论
冠心病属于中医“胸痹”、“心痹”的范畴，其发生机制为气滞血瘀、心脉痹阻。临床研究表明冠心病心绞痛病人具有典型的血瘀证表现【sup】[9]【/sup】。血府逐瘀汤系清代名医王清任集四十余年经验而创的活血化瘀之代表方，专治“胸中血府血瘀之证”，临床广泛用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞等多种疾病的防治，效果较佳，颇受后世医家推崇。
本实验应用冠状动脉结扎造成大鼠急性心肌缺血模型，观察缺血心肌血管新生和bFGF、ANG-1表达的变化。心肌缺血、缺氧后血管新生被激活，新生血管能减轻心肌缺血、较少细胞坏死、预防和逆转左室重构、改善病人的临床症状，但这种自发形成的微血管不能充分代偿冠状动脉阻塞造成的血流损失。现代研究发现通过药物可以促进心梗边缘区血管新生。本实验采用抗体CD34来标记大鼠心梗边缘区切片中血管内皮细胞的表达状况，以反映血管新生情况，并测定、分析比较其内皮细胞数和MVD。在研究血管新生的指标中，MVD是反映血管新生强度的半定量指标。现已被很多实验用于作为检测血管新生的指标【sup】[10]【/sup】。心肌缺血时的血管新生均是由生长因子起作用的，其中FGF、ANG是目前公认的重要促血管新生因子。FGF是一类结构相关的多肽，至少有17种，其中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是研究最多、生物效应最强、作用最广泛的成纤维细胞生长因子之一。bFGF位于细胞核，并调节细胞增殖。体外、体内研究表明，FGF有促进血管内皮细胞增殖、迁移；促进蛋白激酶释放以降解基底膜；促进内皮细胞形成管腔的作用等【sup】[11]【/sup】。也可通过PDGF间接促进平滑肌细胞的增殖。在心肌缺血的模型中，bFGF浓度上升和特异性受体的上调可促进血管新生和侧支循环的建立。除了在原始血管发育的特殊阶段，FGF及其受体在正常心肌中也很少表达，缺血、缺氧等病理情况可促进其表达增加。动物及临床实验亦证明，FGF通过各种途径给药，都能促进血管新生【sup】[12]【/sup】。ANG是新发现的血管新生因子，它的促血管新生活性比FGF更强【sup】[13]【/sup】。本实验发现，超微血府逐瘀汤能显著增加心梗边缘区内皮细胞数和微血管数目，能明显促进心肌缺血后大鼠缺血心肌血管新生作用，其作用机制可能与其上调bFGF、ANG-1的蛋白表达有关。中药超微饮片是湖南省中医药研究院采用现代高新技术与传统炮制技术相结合的新型纳米级中药饮片，既克服传统中药剂型的缺点，又克服中药提取有效成分制剂的偏差，是中药剂型的一次重大改革，具有服用方便、药物溶出率高、有效成分溶出迅速等特点，值得进一步推广使用。
参考文献
[1] 张秋雁，苏剑峰，周小青，等.血府逐瘀汤抗心肌缺血的实验研究.中医研究，2004，17(5)：20-21.
[2] 张秋雁，苏剑峰，周小青，等.桃仁-红花“药对”不同配比的血府逐瘀汤对急性心肌缺血的保护作用.中国中医药信息杂志，2005，12(5)：29-30.
[3] 谭达全，邓冰湘，张秋雁，等.血府逐瘀汤对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡及其相关基因干预作用的实验研究.中国医学杂志,2005,3(5):211-212.
[4] 余浩，张秋雁，邓冰湘，等.血府逐瘀汤对结扎冠脉致大鼠心肌缺血的保护作用.中华医学与健康,2005,(5):6-7 ......
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