寒性药物对大鼠脑梗死的保护作用(2)
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参见附件。
1.1.3实验动物SD大鼠24只，雌雄兼用，体重180～250g，由中国药科大学实验动物中心提供。
1.2方法
1.2.1分组SD大鼠24只，随机分成4组，每组6只。分别为假手术组(只切开颈部皮肤，分离肌层但不插入线栓)、模型组(插入线栓但不给予药物)、中药提取物组(灌胃给予豨莶草提取物7g生药/kg)，阳性药物对照组(灌胃给予尼莫地平12mg/kg),各给药组每天灌胃给药1次,给药体积为1mL/100g，假手术组和模型组给予等量生理盐水连续7天，第7天灌胃给药30min后制备模型，造模后不再给药干预。。其中需手术制作模型的实验组合称手术组。
1.2.2造模参照付宏亮等[2]的方法利用大脑中动脉线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。
(1)制作线栓4-0外科尼龙缝线剪成5cm长的短线，线头稍近火加热，使头端成光滑球即可，球体直径控制在栓线直径的1.5～2倍左右。完成后，距球端3cm作好标记，浸泡于肝素生理盐水中备用。
(2)将大鼠以10%水合氯醛(3mL/kg)腹腔注射麻醉后，手术过程右颈总动脉(CCA) 和颈外动脉(ECA)显露：采用颈部正中切口，暴露右侧胸锁乳突肌，分离肌肉组织，显露出CCA，由此间隙向上分离，找到CCA分叉，其中向内行走的为ECA，向外下行走的为颈内动脉(ICA)。结扎ECA，并在CCA近心端下方穿两根3-0丝线备用。栓线的放置[3]：在近分叉处夹闭CCA，并结扎CCA近心端，提取CCA，用眼科剪在距分叉处约1cm的血管壁上剪一小口，沿切口插入栓线，将预先放置在CCA切口远心端的丝线结扎，松开血管夹，继续送入栓线。当栓线送到分叉处，可轻微提取ECA，直视下将栓线送进ICA。距离分叉处约1.8～2.0cm，有阻力感，停止进入。缝合皮肤，将栓线尾端暴露在外。提拉栓线，当有阻力说明栓线头已达CCA切口，停止，剪去暴露在外的栓线，防止大鼠清醒时拉出栓线大出血死亡。术后注意保暖，大鼠麻醉清醒后2h进行行为学观察。
1.3结果
大鼠手术清醒后即出现了神经损伤症状，主要表现为提尾悬空时，左肩内旋，左前肢内收，肌力下降，行走时向左侧环转,缺血24 h时尤为明显，行为学评分均为2～4分。
1.4讨论
大鼠体重：大鼠体重与其MCA的粗细及长度呈正相关，MCAO模型制作时大鼠的体重与其线长也呈正相关，因此，体重因素在模型的制备中也颇为关键。体重>350g，颅内血管增粗，难以充分阻断MCA血流。
栓线的制备：在模型的制备过程中，栓线是提高模型成功率的关键，一般报告认为大鼠体重250～330g、线长17mm或18mm、栓线直径0.128mm，该方案制作的MCAO模型成功率高、重复性好、生理指标影响小，适合用于探讨脑梗死机理和评价药物疗效。
2豨莶草提取物对大鼠行为学的改善和大鼠脑梗死面积的影响
2.1材料
2.1.1实验仪器常规手术器械。小型三用水箱：北京西城区医疗器械厂；恒温振荡器：57590型，常州国华电器有限公司生产；Leica照相机:S40-SLIDER。
2.1.2药品与试剂TTC(2,3,5-3苯基氯化四氮唑)：SCRC国药集团化学试剂有限公司。
2.2方法
2.2.1大鼠行为学结扎24h后将动物取出，进行行为学评分，采用5分制。
具体评分标准为：0分：无神经功能缺陷征；1分：一侧前肢部分屈曲；2分：一侧前肢完全屈曲；3分：向偏瘫侧转圈；4分：向偏瘫侧倾倒或不能自发行走，意识丧失。
2.2.2大脑梗死面积计算实验动物结扎24h后，断头取脑，-20℃冷冻10～15min，取出大脑,以0.2cm横向切成6片，置于磷酸盐缓冲液配制的2%TTC溶液中，37℃恒温孵育30 min，避光染色，正常大脑组织染色成黯红色，梗死处脑组织不着色，显示为白色。数码相机拍照后经图像分析软件分析梗死区面积,计算梗死区面积与大脑切片总面积的比值[3]。
2.3结果
2.3.1大鼠行为学结果豨莶草提取物对大鼠行为学指标的影响[4]：大鼠手术清醒后即出现了神经损伤症状，主要表现为提尾悬空时，左肩内旋，左前肢内收，肌力下降，行走时向左侧环转,缺血24h时尤为明显，行为学评分均为2～4分。尼莫地平组与模型组相比可明显减轻神经损伤症状。豨莶草组与模型组相比也表现出神经损伤症状的减轻。见表1。
2.3.2大鼠脑梗死面积结果缺血24h取材脑组织，肉眼可见阻塞侧大脑半球肿胀，体积明显增大于对侧。经TTC染色后，在梗死区大脑皮层及皮层下半球可见边界清晰、范围恒定的苍白梗死灶。
表1豨莶草提取物对大鼠行为学
指标的影响(n=6，±s)组别剂量行为学评分假手术组-0模型对照组-3.5±0.8△△尼莫地平组12mg/kg2.5±1.6*豨莶草组7g生药/kg2.7±1.6*注：△△与假手术组相比P<0.001；*与模型对照组相比P<0.05。
阳性药物对照组大鼠的缺血范围小，苍白梗死灶明显。豨莶草组对大鼠脑梗死面积有减小的趋势，但不具有统计学差异。见表2。
表2豨莶草组对大鼠脑梗死面积的影响(n=6，±s)组别剂量脑梗死面积(%)假手术组--模型对照组-35.14±15.66尼莫地平组12mg/kg10.68±10.32*豨莶草组7g生药/kg25.11±7.88注：*与模型对照组相比P<0.05。
2.4讨论
本实验中行为学的测量采用5分制评价方法简便、直接、不需要特殊的仪器，能够从整体上反映神经损伤程度，做出定性且半定量的评价；但实验中人为心理因素较多，可靠程度较低，可以用做初步筛选或辅助性指标。并且以上的检测方法，侧重于其运动功能的评价，忽视了对其感觉功能的评价。
3豨莶草提取物对大鼠血清SOD和MDA的作用
3.1材料
3.1.1实验仪器微量移液器：上海求精生化试剂仪器有限公司；恒温振荡器：57590型，常州国华电器有限公司生产；旋涡振荡器：xw-80A,编号08，上海医科大学仪器厂生产；小型三用水箱：北京西城区医疗器械厂；80-2型离心机：上海手术器械厂；7230分光光度计：上海分析仪器厂。
3.1.2药品与试剂SOD、丙二醛(MDA)测试盒：南京建成生物工程研究所。PBS缓冲液：磷酸二氢钠7.162g 磷酸氢二钠3.12g，分别加蒸馏水100mL前者取81mL,后者取19mL混合, 得1000mL pH 7.4，避光冷藏。
3.2方法
3.2.1血清标本制备缺血24h后将动物于处死前进行腹总动脉取血 ......
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