HPLC法测定解毒祛瘀滋肾方中异阿魏酸的含量
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摘 要：目的：建立HPLC测定解毒祛瘀滋肾方中异阿魏酸含量的方法，为其质量控制提供依据。方法：采用高效液相色谱法对解毒祛瘀滋肾方异阿魏酸的含量进行测定，液相色谱柱碳18柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸(13∶87)，流速1.0mL·min-1，柱温25℃，检测波长为316nm。结果：异阿魏酸含量测定的线性范围0.475~3.800μg，相关系数R为0.9995，加样回收率为98.77%。结论：该法快速、简便、准确，能有效控制该方的质量。
关键词：高效液相色谱法；解毒祛瘀滋肾方；异阿魏酸
中图分类号：R284文献标识码：A
文章编号：1673-7717(2012)04-0706-03
Content Determination of Isoferulic Acid in Jiedu Quyu Zishen Prescription By HPLC
HAN Chun-wen，FAN Yong-sheng，WEN Cheng-ping，DING Xing-hong，XIE Zhi-jun
(Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China)
Abstract:Objective：To establish an HPLC method for determining Iso-Ferulic acid of Jieduquyuzishen Prescription，providing the basis for quality control.Methods：Iso-Ferulic acid of Jieduquyuzishen Prescription was determined by HPLC method. The HPLC system consisted of C18 column，acetonitrile-0.1%phosphoric acid (13∶87)mixture as a mobile phase，the flow rate was 1.0mL/min, column temperature was 25℃, and detecting wave length at 316nm.Results：The liner range was 0.475~3.800ug, r=0.9995,the average recovery rate was 98.77%.Conclusion：The method was quick，simple and accurate.It could be used in the quality control of Jieduquyuzishen Prescription.
Key words:HPLC；Jieduquyuzishen Prescription；Iso-Ferulic acid
解毒祛瘀滋肾方主要由干地黄、升麻、赤芍、白花蛇舌草、青蒿、积雪草等组成，是治疗热毒血瘀阴虚型系统性红斑狼疮的基本方。该方由本课题组自主创制，具有深厚的临床积淀。方中升麻的主要功效为发表透疹，清热解毒。《本草纲目》中记载升麻有“消斑疹，行瘀血”之功。升麻的主要有效成分为异阿魏酸，其含量测定方法有TLC法、HPLC法 [1] 。现建立测定解毒祛瘀滋肾方中异阿魏酸含量的HPLC法，该方法准确、精密、重复性好。
1 仪器与试剂
美国ultimate3000高效液相色谱仪；电子分析天平(上海仪器厂)；异阿魏酸(111698-200602，中国药品生物制品检定所提供)，解毒祛瘀滋肾方(浙江中医药大学中药饮片厂提供，批号：090528，090530，090601)及阴性样品均由浙江中医药大学中药饮片厂提供；甲醇、乙腈为色谱纯；水为去离子双蒸水；其它试剂均为分析纯。
2实验方法
2.1液相色谱分析条件
液相色谱柱碳18柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸(13∶87)，流速1.0mL·min-1，柱温25℃：检测波长为316nm，理论板数按异阿魏酸峰算应不低于5000，色谱数据处理系统为美国ultimate3000高效液相色谱仪。
2.2供试品溶液的制备
取解毒祛瘀滋肾方的药液一袋200mL，放入旋转蒸发仪蒸干浓缩，得浓缩液40mL，加入50%乙醇40mL，12000r/min离心15min，取上清液过有机微孔(0.45μm)，取续滤液作为供试品溶液，备用。
2.3 对照品溶液的配制
精密称取经五氧化二磷干燥过夜的异阿魏酸对照品适量，置10mL棕色量瓶中，加入10%乙醇定容至10mL，摇匀，制成对照品储备液，取配好的对照品储备液依次稀释成23.75、47.5、95、142.5、190μg/mL5份不同浓度对照品溶液，即得。
3 试验结果
3.1专属性实验 取不含升麻的解毒祛瘀滋肾方药液一袋200mL，按供试品溶液制备方法制成阴性样品后，将适量的缺少升麻的阴性样品溶液、对照品溶液、供试品溶液，放入高效液相色谱仪中，取样量设置为20μL。供试品溶液图谱与对照品溶液图谱相同保留时间处有同样色谱峰，色谱峰分离度良好，基线稳定，整个分析在40min时间内完成，阴性样品无干扰。见图1。
A对照品B供试品C阴性样品
3.2 线性关系考察 取配制好的五份不同浓度的对照品溶液进样量20μL，测定。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标进行一元线性回归，回归方程为y=91.63x-1.2016，R=0.9995，结果表明异阿魏酸在0.475~3.800μg范围内线性关系良好。
3.3精密度试验 取解毒祛瘀滋肾方水煎剂(090528)按2.2制备供试品，按2.1液相色谱分析条件，连续进样6次，每次进样20μL，以异阿魏酸峰面积为指标，结果RSD为2.4%，表明本法精密度良好。
3.4重复性试验 取同一批号的解毒祛瘀滋肾方水煎剂(090528)样品，按1.2.2平行制备供试品6份，按2.1液相色谱分析条件，依次进样量20μL，测定异阿魏酸的含量，结果RSD为0.709%，表明本法重复性良好。
3.5加样回收率试验 分别取六份已知含量的解毒祛瘀滋肾方水煎剂(090528)1mL，精密加入适量的异阿魏酸对照品。按2.2项下制备方法平行制备供试品，按1.2.1液相色谱分析条件进样量20μL，测定异阿魏酸的含量，测定结果平均回收率为98.77%，RSD为1.83%。见表1 ......
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