聚合酶联法检测产毒素霍乱弧菌

http://www.100md.com 2005年1月1日 刘 琪 安永群 刘念一 李坤碧 韩力苏

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     [摘要]目的：研究快速、特异、灵敏的检测携带肠毒素基因的霍乱弧菌的聚合酶链法检测技术，应用于突发霍乱疫情现场和各类食品样本中霍乱弧菌的的快速检测。方法：选择霍乱弧菌肠毒素基因上的CTBAB亚单位中稳定区的核苷酸序列制备成霍乱毒素的特异性引物，对01群(稻叶、小川)、O139群霍乱弧菌标准菌株及本地流行株和60份可疑样本检测，进行PCR实验。通过稀释比较法和定时增菌培养检测法，将PCB方法与培养法、免疫胶体金膜层析法的灵敏性与特异性进行比较。结果：细菌经稀释10^-1～ 10^-6以后仍PCB检测阳性，PCB的检测灵敏度为1个DNA考贝。免疫胶体金膜层析法的检测限为10⁶/ml，并存在一定程度的假阳性。霍乱标准菌株均在546bp处出现CTBAB亚单位基因扩增产物，可疑样本均未检测CTBAB亚单位基因产物，与培养结果符合。选择其他肠道传染病病原菌进行特异性实验，证实霍乱弧菌CTBAB亚单位基因引物的特异性，应用常规培养法、一次性快速纸片法、 3种方法对60份可疑样本检测证实，PCR方法的特异性与培养法一致，PCR法的特异性超过免疫胶体金膜层析法。检测灵敏度实验该引物对霍乱弧菌的检测敏感基线为1个DNA考贝。结论：该实验整个过程仅需4～6小时，适用于疫情现场对霍乱弧菌的快速仪器检测。

    [关键词]霍乱弧菌；CT毒素；快速检测；PCR

    文章编号：1009—5519(2005)01—0022—02

    中图分类号：R446

    文献标识码：A

    http://www.100md.com/html/paper/1009-5519/2005/01/17.htm

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