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编号:11503829
丁酸钠诱导HepG2细胞凋亡机制的研究(2)
http://www.100md.com 2007年11月15日 《现代医药卫生》 2007年第22期
     1.5 RT-PCR检测hTERTmRNA表达:(1)总RNA提取:使用总RNA抽提试剂盒,按试剂说明书进行操作;(2)逆转录成cDNA(RT):取总RNA 2 μl(1 μg)进行逆转录反应合成cDNA;(3)PCR反应:cDNA 10 μl,进行PCR循环反应:94℃ 45s、52℃ 45s、 72℃ 45s,共35个循环,最后72℃延伸5分钟。hTERT引物 sense: 5'-GAAGAGTGTCTGGAGCAAGTTGCA-3',antisense:5'-TCCACCTTGACAAAGTACAGCTCAG-3',分子量405 bp;(4)PCR产物分析:PCR产物于2%琼脂糖凝胶电泳,EB染色20分钟,Tanon GIS凝胶成像系统进行密度指数(densitometry index)分析[2]。β‐actin RT-PCR扩增为内参照,分子量230 bp,以不加模板总 RNA 的RT-PCR为阳性对照。hTERT mRNA相对表达量的测定:以各hTERT电泳条带密度指数与相对的内参照密度指数之比来表示。

    1.6 统计学分析:数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS11.5统计软件分析,应用t检验、χ2检验、方差分析检验各组数据间的差异。

    2 结果

    2.1 丁酸钠对HepG2细胞增殖的影响:丁酸钠与HepG2细胞共同培养24、48小时,对照组与实验组比较差异无显著性(P>0.05)。丁酸钠与HepG2细胞共同培养72小时,对照组与实验组比较差异有显著性(P

    2.3 丁酸钠对HepG2细胞端粒酶活性的影响:检测发现,对照组HepG2细胞端粒酶活性为(3.58±0.33),经丁酸钠处理后,端粒酶活性下降为(1.16±0.12),两组间比较差异有显著性意义(P, 百拇医药(胡孝乾)
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