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编号:11607380
RP-HPLC法测定环索奈德含量及有关物质的研究
http://www.100md.com 2008年4月15日 《现代医药卫生》 2008年第8期
RP-HPLC法测定环索奈德含量及有关物质的研究
RP-HPLC法测定环索奈德含量及有关物质的研究
RP-HPLC法测定环索奈德含量及有关物质的研究

     [摘要]目的:研究环索奈德的RP-HPLC含量测定及有关物质的检测方法。方法:采用C18柱(5μm,4.6mm×250mm),流动相为甲醇一水(90: 10),检0Qc波长为242nm。结果:环索奈德在0.5~0.005mg/ml浓度范围内,峰面积与浓度呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为(99.8q±0.85)%。结论:本法简便,专属性及重现性好,可用于测定环索奈德含量及有关物质。

    [关键词]环索奈德;反相高效液相色谱法;有关物质

    文章编号:1009-5519(2008)08-1236-02 中图分类号:R9 文献标识码:B

    环索奈德是由德国ALTANA公司合成的一种新的用于治疗哮喘的糖皮质激素类药物。该药物的气雾剂首先于2004年在澳大利亚获得上市许可,环索奈德是一种酯类前体药物,本身无药理活性,必须在体内经过酯酶催化水解为有活性的环索奈德,其每天使用1次,每次根据症状的严重程度为80~160μg。是到目前为止惟一的1个每天使用1次的糖皮质激素类药物。环索奈德是采用16-α羟基泼尼松龙为原料合成的。本试验采用HPLC法,建立了用于检测环索奈德含量与有关物质的检测方法,本方法可以将环索奈德与中间产物,降解产物进行分离,可以用于测定本品含量与有关物质。
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    1 材料与方法

    1.1 仪器与色谱条件:美国ALLTECH-426液相色谱仪(单元泵、自动进样器、紫外检测器、工作站),北京普析7U-1901l型紫外分光光度计,Waters 2695型HPLC OVater8 996型光电二极管阵列检测器,Millennium32512作站)。色谱柱:LunaCl8(5μm,4.6mm×250mm);流动相:甲醇:水(90:10);检测波长:242nm;流速:1.0ml/min,进样量:20μl;温度:室温。

    1.2 药品与试剂:环索奈德精制品:纯度为99.9%;批号:20030801;合成中间体1,2,3,均由成都一研究所提供。甲醇(色谱纯),纯水(自制)。环索奈德及中间体结构式(见图1)。

    1.3 色谱条件的优化确定

    1.3.1 检测波长的选择:分别取环索奈德精制品、中间体1,2,3,加乙醇溶解并稀释成每1ml中约含50μg的溶液,在200~400nm波长范围内扫描,环索奈德与中间体紫外图谱接近(见图2),均在242nm有最大吸收,故选择242nm为检测波长。
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    1.3.2 测定浓度的选择:预定有关物质测定浓度为0.5mg/ml,含量测定浓度为50μg/ml。

    1.3.3 流动相的优化:环索奈德为甾体类药物,参考其他同类品种的质量标准,另根据本品的结构特点和理化性质,选择3种体系流动相:(1)甲醇:水(90:10),不同比例(70~90:30~10),仅比例为90:10时,与中间体可有效分离,保留时间短,其他比例保留时间长,峰形差。(2)乙腈;水保留时间长,峰形差。(3)乙腈:甲醇:水(50:40:10),峰形差,分离差,进一步调整比例,分离情况较好,但是峰形差,最终确定甲醇:水(90:10)为流动相。

    2 结果

    2.1 专属性检查

    2.1.1 中间体分离试验:取环索奈德精制品及各中间体适量,加乙醇溶解并稀释制成各成分约为50μg/ml的混合液,进样20μl。结果表明:环索奈德的保留时间为7.88min,分离度符合规定(见图3)。
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    2.1.2 降解产物的分离试验:(1)样品强光(4000Lx)连续照射10d,变为黄色。(2)样品直火加热至分解变棕褐色。破坏后样品分别加乙醇溶解并稀释成每1ml中约含0.5mg的溶液,摇匀,滤过,奋进样20μl,结果降解产物与主峰能较好分离。

    2.1.3 峰纯度检查:取精制品溶液(25μg/ml)进样,用二极管阵列检测器检测峰纯度角显示,样品峰纯度角为0.364,阈值为0.534,均小于1,表明该色谱条件下,样品主峰为一纯峰。

    2.2 柱效试验:取环索奈德的细粉适量,加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含50μg的溶液,进样20μl,色谱工作站计算的理论塔板数为7961。

    2.3 线性试验:精密称取环索奈德精制品(含量99.9%)50.00mg,置100ml量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液;精密量取贮备液适量分别置10ml量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,将最小浓度溶液继续倍比稀释至5μg/ml,分别进样20μL,以峰面积为因变量A,以浓度为自变量C,得线性方程:A=2×1007C+12554,r=0.9999,n=5,线性范围5~500μg/ml。
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    2.4 溶液的稳定性试验:精密量取线性试验项下的溶液(50μg·ml-1),室温下放置,分别于0,2,4,6,8 h取样测定,结果RSD=0.17%,表明环索奈德溶液在室温下放置8h内稳定。

    2.5 精密度试验:取溶液稳定性试验项下的溶液,连续进样5次,计算平均值,结果RSD=1.17%,表明本方法精密度良好,可满足含量测定的要求。

    2.6 回收率试验:精密称取环索奈德精制品9份(含量为99.9%),按含量测定浓度的80%,100%,120%取样,分别置100ml量瓶中加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。精密量取贮备液1.0ml,分别置10ml的量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件测定。计算回收率。结果表明,本方法的平均回收率为99.8%,RSD=0.85%,表明方法准确度良好。

    2.7 最小检出量:取分离试验项下的精制品溶液及各中间体溶液,分别加流动相稀释成约10μg/ml的稀溶液,进样10μl,计算信噪比。以信噪比为3:1时计算最低检出量,以信噪比为10:1时计算定量限。结果环索奈德最低检出量为0.1ng,定量限0.3ng。
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    2.8 含量及有关物质测定

    2.8.1 含量测定:精密称取环索奈德适量,加乙醇溶解并稀释制成每lml含50μg的溶液,作为供试品溶液;另取经105℃干燥至恒重的环索奈德精制品适量,加乙醇溶解并稀释制成每1ml中含540μg的溶液,作为对照品溶液。量取供试品及对照品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法计算含量。

    2.8.2 有关物质测定:由于环索奈德测定的有关物质含未知杂质,故采用自身对照法,色谱条件同含量测定法。

    测定法:精密称取环索奈德适量,加乙醇溶解并稀释制成每1ml中约含0.5 mg的溶液,作为供试品溶液;量取供试品溶液适量,加流动相稀释制成每1ml中含5μg的对照溶液。量取对照溶液20μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%~30%;再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰,量取各杂质峰面积的和,不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%)。

    3 讨论

    紫外检测器到目前仍为一种常用检测器,具有光源能量高、辐射强度大、单色性好、附加噪声小、光源稳定的特点,根据合成路线,可能引进的中间体为1,2,3,其与样品具有相同的结构母核,所以其紫外吸收图谱基本一致。由图3可见,精制品和各中间体等摩尔浓度在242nm处吸收度基本一致,且灵敏度高。本实验选择242nm波长,可以增加方法的通用性。, 百拇医药(朱 静 韩 光)