正交实验法优选复方蚕蛹胶囊的提取工艺研究

http://www.100md.com 2008年12月15日 《现代医药卫生》 2008年第24期

     【摘要】目的：优选复方蚕蛹胶囊的醇提工艺。方法：采用 L9(34)正交试验 ，以人参皂苷Rg1和浸膏得率为指标，考察乙醇浓度、加醇量、回流时间对提取效果的影响。结果：最佳工艺为：药材加70%乙醇回流提取2次，第一次用8倍量的乙醇，回流2小时；第二次用7倍量的乙醇，回流1小时。结论：本研究为复方蚕蛹胶囊的醇提工艺的确定提供实验依据。

    【关键词】复方蚕蛹胶囊；正交试验；提取工艺

    文章编号：1009-5519(2008)24-3645-02 中图分类号：R28 文献标识码：A

    复方蚕蛹胶囊主要由蚕蛹、三七、丹参等中药提取制备而成，用于治疗肝纤维化、痰瘀互结证。本文采用HPLC法测定，以人参皂苷Rg1[1，2]的提取率和浸膏得率为指标综合评价，用正交实验法对复方蚕蛹胶囊的提取工艺进行了优选。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器：岛津LC-10ADVP高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测器，HW色谱工作站；Libror AEL-40SM电子天平(Shimadzu公司)；ZF-6050型真空干燥箱(上海精宏实验仪器有限公司)。

    1.2 试药：蚕蛹、三七、丹参等药材均购自安徽省亳州市中药饮片厂；人参皂苷Rg1对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110703-200424)；甲醇、乙腈为色谱纯；其它试剂均为分析纯；水为二次重蒸馏水。

    2 方法与结果

    根据处方中药材中有效成分的性质特点，复方蚕蛹胶囊的提取工艺路线初步定为，用较高浓度的乙醇回流提取2次，将两次提取的回流液合并，减压回收乙醇，浓缩得浸膏， 待用。

    2.1 复方蚕蛹胶囊的醇提工艺优选

    2.1.1 因素水平的选择：乙醇回流提取的主要影响因素为乙醇浓度，加醇量，提取次数和提取时间，经预试验确定次数为2次，现按三因素三水平选L9(34)表安排正交实验，各因素水平见表1。

    2.1.2 样品制备

    2.1.2.1 正交实验含量测定样品的制备：按处方比例称取2倍处方量的药材，按照正交实验表顺序回流提取，提取液滤过，滤液减压回收乙醇后，用水定容至500 ml，从中量取25 ml，用乙醚洗涤2次，每次20 ml；用水饱和的正丁醇萃取2次，每次30 ml，萃取液先以1%碳酸氢钠溶液50 ml洗涤，再以50 ml正丁醇饱和的水洗涤，最后将正丁醇液水浴蒸干，用甲醇定容至50 ml，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

    2.1.2.2 人参皂苷Rg1对照品的制备：取105 ℃干燥恒重的人参皂苷Rg1适量，精密称定，置于10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配成浓度为0.5 mg/ml的溶液。

    2.1.3 浸膏得率测定：按照2.1.2.1中方法从500 ml中量取25 ml，水浴挥干，置烘箱中105 ℃烘干5 h，置干燥器中冷却20 min，称重，恒重后计算浸膏得率。

    2.1.4 含量测定：色谱条件：样品中人参皂苷Rg1采用HPLC法进行测定，选用Hypersil ODS2柱(250×4.6 mm，5 ?滋m)；流动相为乙腈∶水=25∶75；检测波长203 nm；流速1 ml/min；柱温为25 ℃；进样量10 μl。测定结果见表2，方差分析见表3。

    2.1.5 结果分析：由表3方差分析结果可以看出，A因素即醇浓度对实验结果影响显著，B和C均不显著，各因素的主次顺序为A、C、B，即醇浓度、提取时间、加醇量。从直观分析表中可知最佳工艺为A1B3C3，考虑到实际生产和经济效益，确定最佳工艺为A1B2C3，即：用70%乙醇回流提取2次，第一次加8倍量乙醇，回流提取2 h，第二次加7倍量乙醇，回流提取1 h。

    3 最佳工艺验证试验

    最佳工艺放大验证：取10倍处方量的药材，用70%乙醇提取2次，第一次加8倍量乙醇，回流提取2 h，第二次加7倍量乙醇，回流提取1 h，结果人参皂苷Rg1提取率和浸膏得率均处于较高水平，说明该提取工艺合理、稳定、可行，结果见表4。

    验证实验表明，正交优选方案提取的结果与正交试验结果接近，能符合制剂要求。

    4 讨论

    4.1 根据有关的文献资料，三七中的人参皂苷Rg1等有效成分都属于四环三萜类皂苷都需要用较高浓度的乙醇提取，进行了正交实验的考察优选后，将最终的工艺确定为用70%乙醇提取两次，第一次加8倍量乙醇，提取2 h，第二次加7倍量65%乙醇，提取1 h。通过验证实验证明工艺稳定可行(见图1)。

    4.2 实验中用HPLC测定人参皂苷Rg1的含量时，采用乙腈∶水=25∶75作为流动相, 分离效果要比甲醇-水的分离效果好，人参皂苷Rg1能达到基线分离(见图2)。进样前，样品需经过纯化富集人参皂苷Rg1后才能达到基线分离，仅仅用乙醚洗涤效果不理想，需要用水饱和的正丁醇进行多次萃取，这样处理后的样品峰基本无干扰。

    参考文献：

    [1] 石小枫，徐 曼，刘 杞.三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的影响[J].中药药理与临床，2001，17(2)：7.

    [2] 蔡燕玲，黎罕文，杨晓明.三七的药理研究进展[J].陕西中医学院学报，2001，24(5)：57.

    收稿日期：2008-08-05(张先洪　胡　芳　张兴德　程建明)

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/paper/1009-5519/2008/24/02.htm