张 珍，魏义花，杜镇镇，周秀芝(滨州医学院：.病原生物学实验室；.临床学院，山东 滨州56603)

    幽门螺杆菌是引起人类胃炎、消化道溃疡及胃癌的重要病原体，是一种微需氧、弯曲状的革兰阴性杆菌[1]。幽门螺杆菌的致病能力与其菌体表面的热休克蛋白60(hsp60)密切相关[2]，不同菌株的 hsp60氨基酸序列即GroEL蛋白相对保守、抗原性较强[3]，主要通过刺激单核-巨噬细胞或胃上皮细胞释放 IL-1β、IL-8、TNF-α 等炎症细胞因子加剧病情的发展[4]，但不同来源的幽门螺杆菌菌株及其hsp60对细胞因子分泌是否有差异鲜见报道。本实验通过基因定点突变、蛋白表达等技术获得了幽门螺杆菌标准株26695的hsp60(即非胃癌来源株)与胃癌来源株的重组热休克蛋白(rhsp60)[5]，将不同浓度的2种蛋白与U937细胞共培养，在前期证实rhsp60可促进IL-6的分泌的基础上[6]，观察其对U937细胞分泌TNF-α、IL-17的影响，旨在研究不同来源菌株的菌体成分感染与细胞因子表达水平的关系，进一步明确幽门螺杆菌的致病机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌种与细胞株 大肠杆菌BL21、幽门螺杆菌标准菌株ATCC26695、人髓系白血病细胞系U937细胞为本实验室保存。

    1.1.2 试剂 rhsp60与hsp60蛋白(本实验室自制保存)，RPMI-1640培养基、胎牛血清(Hyclone生物制品公司)，TNF-α、IL-17 试剂盒(美国 RD 公司)，佛波酯(PMA)(Sigma公司)。

    1.1.3 仪器 生物安全柜(上海博迅实业公司)，全自动高压灭菌器(日本三洋电器公司)，倒置荧光显微镜IX70-142(日本奥林巴斯)，全自动酶标仪、细胞培养箱(赛默飞世尔科技公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 U937细胞的培养与PMA处理 将冻存的U937细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基于37℃、5%CO2培养箱中常规培养传代 ......