鲁生念，廖永美，赵逵

    (遵义医学院，贵州遵义563099)

    阿司匹林对结肠癌细胞肿瘤干性标记物CD44蛋白表达的影响

    鲁生念，廖永美，赵逵

    (遵义医学院，贵州遵义563099)

    目的研究人结肠癌细胞系SW-480、HT-29中肿瘤干细胞干性标记物CD44蛋白受阿司匹林不同药物浓度的影响变化，从而探讨阿司匹林是如何预防结直肠癌的发生。方法采用激光扫描共聚焦显微技术：免疫荧光双标染色法检测结肠癌细胞系SW-480、HT-29中CD44的表达；用Western blotting检测不同浓度阿司匹林(0、2.5、5.0、10.0 mmol/L，即分别为空白对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组)作用下，CD44在COX-2阴性表达的SW-480细胞及COX-2高表达的HT-29细胞表达影响。结果SW-480、HT-29中存在CD44阳性细胞，2种细胞表达的CD44荧光值比较，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株人结肠癌细胞株SW-480、HT-29分别购买于重庆医科大学细胞实验室及中国科学研究院上海细胞库。

    1.1.2 药物和主要试剂阿司匹林、胰蛋白酶及乙二胺四乙酸(EDTA)购于美国Sigma公司，1640培养基及胎牛血清购于美国Hyclone公司，小鼠抗人CD44单克隆抗体购于美国Cell Signling Technology公司，小鼠抗人β-actin辣根酶标记山羊抗兔IgG及辣根酶标记山羊抗小鼠IgG购于北京全式金生物技术有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞的培养用含10%胎牛血清及1%双抗的1640培养基培养人结肠癌细胞株SW-480、HT-29，孵箱的条件设置为37℃、5%CO2，培养瓶为25 cm2，细胞贴壁生长，当生长状态良好并融合至80%～90%时，用0.25%胰蛋白酶加0.02%EDTA混合液消化、离心(1000 r/min，5 min)，进行传代培养，将处于对数生长期、状态优良的细胞收集用于实验。

    1.2.2 免疫荧光双标法检测SW-480和HT-29细胞中CD44的表达将高压后的无菌盖玻片置于6孔板中，进行细胞种板，种板时调整每孔细胞密度为0.8×105mL-1，继续培养过夜，贴壁后4%多聚甲醛进行固定，用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗，用0.5%Triton-X-100的PBS通透化15 min，1%牛血清蛋白(BSA)封闭；加入按抗体说明书进行1∶400稀释的鼠抗人CD44单克隆抗体 ...... 濠碘€冲€归悘澶愬箖閵娿儲韬ù锝堟硶閺併倝骞嶇€ｎ偅绨氱紒娑橆槹缁侊妇鎲撮崼鐔割槯闁哄啰濮电涵鍫曞蓟閵壯勭畽闁瑰瓨鐗旂粭鍛姜閽樺寮块柡鍌氭祫缁辨繈宕ｉ婵嗗幋闁哄嫷鍨甸～锕傚箹濠婂懎鍋嶇€殿喗娲橀幖鍛婂緞鏉堚晜鍩傞柍銉︾矎濞村棝鎯嶆担娴嬪亾濠垫挾绀夐悹鍥棑閸嬶綁宕欑拠鑼綄妤犵偞娲樺〒鑸电▔鐎ｎ偅鐓欓柣銊ュ閳ь剚绮庨弫鎼佹嚇閹寸姴顣奸柍銉︾箖閸ㄣ劑鍨惧⿰鍐ㄦ枾缂傚啯鍨块妴澶愬灳濠靛⿴鍟忛梻鍌ゅ枔閳ь剨鎷�


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