陈 曦，付晓霏，赵 逵

    (1.遵义医学院附属医院消化内科，贵州遵义563000；2.娄底市中心医院消化内科，湖南417000)

    塞来昔布和埃罗替尼对结肠癌细胞HT-29的协同抑制作用

    陈 曦1，付晓霏2，赵 逵1

    (1.遵义医学院附属医院消化内科，贵州遵义563000；2.娄底市中心医院消化内科，湖南417000)

    目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂及环氧化酶-2(COX-2)抑制剂埃罗替尼、塞来昔布及二者联合用药对结肠癌细胞HT-29增殖的抑制作用及其机制。方法 将HT-29细胞分为对照组(完全培养基)、塞来昔布组(220μmol/L)、埃罗替尼组(50μmol/L)及联合用药组(塞来昔布220μmol/L、埃罗替尼50μmol/L)四组，作相应处理后均在适宜条件下培养；48 h后采用MTT法观察细胞抑制率，Real-time PCR法及Western blotting法检测EGFR、COX-2mRNA及蛋白表达情况，ELISA法检测前列腺素E2(PGE2)含量。结果 48 h后塞来昔布组和埃罗替尼组对HT-29细胞抑制率分别为(56.6±4.3)%和(56.9±3.9)%，联合用药组抑制率为(86.1±7.1)%，与单独用药组比较，联合用药组对HT-29细胞增殖的抑制作用更明显，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料 人结肠癌HT-29细胞(中科院上海细胞库)；胎牛血清(Hyclone公司)；胰蛋白酶与MTT、McCoy′S5A培养基(Sigma公司)；塞来昔布(北京贝科里生物科技有限公司)；埃罗替尼(上海英轩医药科技有限公司)；Trizol试剂及LipofectamineTM2000(Invitrogen公司)；反转录和荧光定量PCR试剂(Takara公司)；山羊抗人COX-2多克隆抗体、小鼠抗人EGFR单克隆抗体、小鼠抗人βactin多克隆抗体(Santa Cruz公司)；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG及兔抗山羊IgG(中杉金桥公司)；ELISA试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 用含10%胎牛血清的McCoy′S 5A培养基常规培养HT-29细胞，待细胞生长到80%～90%时消化传代，待细胞生长良好且处于对数期时进行实验。

    1.2.2 实验分组及药物干预 将细胞分为对照组(加完全培养液)、塞来昔布组(220μmol/L)、埃罗替尼组(50μmol/L)及联合用药组(塞来昔布220μmol/L、埃罗替尼50μmol/L)四组 ......