李 廷，徐 涛，张延辉，刘春雷

    (1.青岛市妇女儿童医院，山东266000；2.青岛市中心医院，山东266000)

    G250mAb 修饰的肿瘤细胞靶向基因载体功能研究

    李 廷1，徐 涛2，张延辉2，刘春雷2

    (1.青岛市妇女儿童医院，山东266000；2.青岛市中心医院，山东266000)

    目的分析G250mAb与聚乙烯亚胺(PEI)偶联作为肿瘤靶向基因载体系统的优越性，为肿瘤细胞靶向基因治疗提供研究基础。方法通过二硫键将G250mAb与PEI偶联，得到修饰后的基因载体G250mAb-PEI，利用体外转染细胞的方法研究其转基因的优越性。结果G250mAb-PEI转染效率明显高于单纯PEI或传统脂质体转染；其毒性也较未修饰的PEI低；对人宫颈癌细胞Hela的基因转染具有显著的靶向性，其转基因效率是肝癌细胞HepG2(G250阴性)的2倍，而对正常血管平滑肌细胞的基因转染效率较Hela低近20倍。结论G250mAb-PEI是一种高效、低毒和具有靶向性的基因载体。

    Hela细胞； 聚乙烯亚胺； 遗传载体； 肿瘤/病理学； 基因； 转染； G250mAb

    基因治疗的发展出现障碍，最主要的问题是如何有效地将基因释放到靶细胞中长期稳定地表达，同时较少产生不良反应，即载体效率、靶向性和安全性[1]。高分子基因传递系统曾取得较大进展，结构简单的高分子很难使DNA穿越细胞内的所有屏障，设计多成分、多性能载体将是高分子基因治疗的研究方向[2]。单克隆抗体用于提高肿瘤治疗的靶向性具有重要意义。自创立单克隆抗体制备技术以来，单克隆抗体的研制与应用使靶向药物迅速发展[3-4]，对肿瘤靶向治疗具有重要意义。目前研制的抗肿瘤靶向药物大部分属于单抗制品或以单抗为靶向载体的免疫偶联物，其中，单克隆抗体与靶细胞行抗原-抗体特异性结合，使药物或放射性核素释放的射线损伤与抗体结合的靶细胞DNA，从而发挥抗肿瘤作用[5]。目前单抗在肿瘤的靶向治疗领域有着重要的地位[6]。G250是膜相关性的碳酸酐酶，在肿瘤的发生、发展中起重要作用。肾癌G250抗原有良好的肿瘤特异性，其在肾癌细胞中的特异表达使其成为肾癌诊断和治疗的重要靶位。本文将G250mAb与聚乙烯亚胺(PEI)偶联，选用人宫颈癌细胞Hela(G250阳性)和人肝癌细胞HepG2、大鼠平滑肌细胞(SMC，G250阴性)，利用体外细胞培养技术，检测G250mAb修饰的PEI对Hela细胞基因转染的靶向性。

    1 材料与方法

    1.1 材料 PEI枝化型(相对分子质量为25 000)、N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)和2-咪唑硫烷均来自美国Sigma公司；转染试剂盒(LipofectamineTM2000)来自美国Invitrogen公司；小鼠成纤维细胞(NIH3T3 ......