陈爱珍，胡方进，林菲菲

    (福建医科大学附属龙岩第一医院血液内科，福建龙岩364000)

    脂肪来源干细胞移植抑制脑缺血大鼠Neurocan的表达

    陈爱珍，胡方进，林菲菲

    (福建医科大学附属龙岩第一医院血液内科，福建龙岩364000)

    目的 探讨脂肪来源干细胞(ADSC)移植对脑缺血大鼠神经蛋白聚糖(Neurocan)表达的影响。方法 选取清洁级成年雄性SD大鼠54只，随机分为假手术组、模型组(大脑中动脉栓塞)和ADSC组(大脑中动脉栓塞后移植ADSC)，每组18只。大脑中动脉栓塞模型采用改良Zea-Longa线栓制法，ADSC移植前用二脒基苯基吲哚标记，ADSC组于造模成功1 d后经侧脑室注入ADSC(1×106cells)。分别于术后7、14、28 d将大鼠断头取脑，采用免疫荧光、蛋白质印迹检测脑组织Neurocan蛋白表达情况。结果 术后第7、14天模型组大鼠脑组织Neurocan表达明显升高，呈片状不规则分布，至28 d下降，但仍高于假手术组，差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料 选取实验动物清洁级成年SD雄性大鼠(体质量250～280 g)54只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。自来水喂养，自由进食普通颗粒型大鼠饲料，动物房温度控制在22～25℃。二脒基苯基吲哚(diamidino-phenyl-indole，DAPI)由 Sigma公司提供；兔抗大鼠CD44、CD34、CD106抗体由Santa Cruz公司提供；细胞培养瓶由Coming公司提供；Ⅰ型胶原酶、2.5 g/L胰酶、胎牛血清、杜氏改良Eagle培养基/LG复合培养基由Gibco公司提供；小鼠抗大鼠单克隆Neurocan抗体(一抗)由Chemicon公司提供；山羊封闭血清、四甲基若丹明异硫氰酸盐标记的山羊抗小鼠免疫球蛋白G-HRP(二抗)由北京中杉剑桥公司提供；小鼠抗大鼠β-actin抗体由武汉博士德公司提供；蛋白质印迹(Western blot)试剂由碧云天公司提供。

    1.2 方法

    1.2.1 实验方法

    1.2.1.1 ADSC分离、培养、鉴定及标记 参照文献[3]进行ADSC分离、培养、鉴定及标记。

    1.2.1.2 动物分组 将54只大鼠随机分为假手术组、模型组(大脑中动脉栓塞)和ADSC组(大脑中动脉栓塞后移植ADSC)，每组18只。每组均按术后7、14、28 d不同时间点分为3个亚组，每个亚组6只。

    1.2.1.3 脑缺血动物模型及ADSC侧脑室移植模型的建立 参考改良Zea-Longa线栓法制备大脑中动脉栓塞模型 ......