杨名慧，赵学发，葛正龙△(.遵义医学院生物化学与分子生物学教研室，贵州遵义563003；.黔南州人民医院检验科，贵州都匀558000)

    重组质粒pαACP-HSP70的特异性表达研究*

    杨名慧1，赵学发2，葛正龙1△

    (1.遵义医学院生物化学与分子生物学教研室，贵州遵义563003；2.黔南州人民医院检验科，贵州都匀558000)

    目的观察重组质粒pαACP-HSP70在晶状体组织和非晶状体组织中的表达情况，探讨重组质粒pαACPHSP70的特异性表达。方法以晶状体组织作为A组，肺小细胞癌细胞A549、肝癌细胞7402等非晶状体组织作为B组，采用阳离子脂质体转染法将pCMV-HSP70质粒、pαACP-HSP70质粒导入A、B组后，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。结果转染pCMV-HSP70质粒到A、B组24 h后发现，两组均有绿色荧光；另外，转染pαACP-HSP70质粒24 h后仅在A组能观察到绿色荧光。结论重组质粒pαACP-HSP70不能在非晶状体组织表达，仅能在晶状体上皮细胞表达，具有组织特异性。

    晶体；α晶体蛋白A链；HSP70热休克蛋白质类；绿色荧光蛋白质类；特异性

    白内障作为首位致盲疾病，其导致视力障碍给白内障患者的生活质量带来极大的影响。手术治疗为白内障患者提供了最终治疗的有效手段，但手术治疗会给患者带来巨大的经济负担和风险及发生术后并发症[1]。因此，研究和发现新的预防、延缓白内障的非手术方法和措施具有显著意义。随着分子生物学技术的发展，基因治疗疾病引起人们的重视，通过导入外源基因来防治白内障的可行性处在研究阶段。目前，外源基因表达主要应用巨细胞病毒(CMV)启动子，CMV启动子虽然高效，但外源基因表达没有细胞特异性[2]。基因治疗所需解决的首要问题是外源基因的特异性表达，一方面增强对特定靶点的调控，另一方面减少对非特定靶点的干扰。组织特异性启动子的引入能够增强外源基因的特异性表达。本课题组前期成功构建特异性启动子αA晶体蛋白基因与热休克蛋白70(HSP70)基因片段重组质粒[3]，本研究继续深入研究重组质粒pαACP-HSP70是否具有组织特异性，为在白内障的基因防治中提供更多的实验依据。

    1 材料与方法

    1.1材料实验动物为6～8周SD大鼠，购于第三军医大学大坪医院实验动物中心，动物合格证：SCXK(渝2012-0005)；肝癌7402细胞、肺小细胞癌A549细胞购自中国科学院上海细胞库；pαACP-HSP70质粒、pCMVHSP70质粒(由本教研室构建)；多价阳离子脂质体(LipofectamineTM2000 ......