王颖，黄勇，张小容，罗高兴，贺伟峰，吴军

    (第三军医大学西南医院全军烧伤研究所/创伤、烧伤及复合伤国家重点实验室/疾病蛋白组学重庆市市级重点实验室，重庆400038)

    尿蛋白电泳分析和质谱鉴定

    王颖，黄勇，张小容，罗高兴，贺伟峰，吴军△

    (第三军医大学西南医院全军烧伤研究所/创伤、烧伤及复合伤国家重点实验室/疾病蛋白组学重庆市市级重点实验室，重庆400038)

    目的探究尿蛋白的最佳沉淀方法，且对常规损失蛋白进行鉴定分析。方法采用有机溶剂沉淀法，即用三氯乙酸/90%丙酮法、三氯乙酸/100%丙酮法和90%丙酮法分别沉淀尿液中蛋白质，对90%丙酮法所得到沉淀的可溶部分和不溶部分进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺分离和质谱鉴定。结果90%丙酮沉淀法获得的尿蛋白量相对较高。将90%丙酮法沉淀的尿蛋白不溶部分和可溶部分进行质谱鉴定，可溶部分得到53种蛋白，不溶部分得到49种蛋白，且不溶部分特有的蛋白包括免疫球蛋白κ轻链基因1～5、谷氨酰氨肽酶、突变体1、芳基硫酸酯酶A前体等14种。结论尿液沉淀的不溶部分中特有蛋白的发现有助于尿液蛋白质组的全谱研究，对临床特异蛋白的检测具有重要意义。

    蛋白尿/诊断；沉淀；电泳，聚丙烯酰氨凝胶；蛋白质组学；质谱分析法

    尿液是血液经肾小球滤过，肾小管和集合管重吸收、排泄及分泌产生的终末代谢产物[1]。因此，能在血清中发现的蛋白也可能在尿蛋白中被检测到。尿液的组成与性状可反映整个泌尿系统状况，尤其是尿液中蛋白质种类和数量的变化携带有泌尿系统疾病发生、发展及预后的各种信息，尿液还能反映其他人体器官的相关情况。尿液来源简单、方便、无损伤，患者容易接受，无不适感及禁忌证。随着尿液蛋白质组学的发展，各种沉淀尿蛋白的方法得到大量探索。刘靖芳等[2]采用丙酮沉淀法、乙腈/0.1%三氟乙酸沉淀法及三氯乙酸/丙酮沉淀法沉淀尿液标本中蛋白质，对沉淀蛋白进行双向电泳，结果显示，三氯乙酸/丙酮沉淀法能提高尿液标本双向电泳蛋白检出灵敏度，提高检测效果。有研究采用50%丙酮沉淀法、超滤离心法提取尿蛋白，结果显示，丙酮沉淀法获得的蛋白质谱鉴定数目更多[3]。有研究采用醋酸、丙酮、乙腈、硫酸铵、氯仿、乙醇、甲醇分别按10%、25%、50%、75%、90%进行蛋白沉淀发现，90%乙醇沉淀的尿蛋白获得最高回收率[4]。Adachi等[5]通过超虑法浓缩尿蛋白，质谱鉴定到1 500种高可信蛋白。Lee等[6]对真空离心、乙醇沉淀、超滤、富集柱4种方法比较蛋白回收率发现，真空离心蛋白回收率最高。尽管蛋白质技术在不断发展、更新 ...... 婵″倹鐏夐幃銊ユ躬娴ｈ法鏁ら幍瀣簚缁涘绁︾憴鍫熸閺冪姵纭堕弻銉ф箙閹存牔绗呮潪钘夊弿閺傚浄绱濋崣顖濆厴閺勵垵顫﹂幖婊呭偍瀵洘鎼告径杈╂埂閳ユ粏娴嗛惍浣测偓婵撶礉鐠囬鍋ｉ崙璇茬潌楠炴洘娓舵稉瀣煙閻ㄥ嫧鈧粎鏁搁懘鎴犲閳ユ繃鍨ㄩ垾婊冨斧缂冩垿銆夐垾婵婎問闂傤喓鈧拷


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