王 丽，马跃荣(成都中医药大学附属医院病理科，四川成都610036)

    ·论 著·

    免疫磁珠法分离纯化乳鼠肾血管周细胞*

    王 丽，马跃荣

    (成都中医药大学附属医院病理科，四川成都610036)

    目的 通过建立肾原代细胞培养，探讨免疫磁珠分离纯化乳鼠肾血管周细胞的方法。方法 选取健康BALB/c乳鼠肾脏，剪碎、消化和过滤制成细胞悬液，原代培养并传代(传3代)。免疫磁珠法分离出神经胶质细胞2型硫酸软骨素糖蛋白(NG-2)；倒置相差显微镜观察细胞形态特点，免疫细胞化学检测NG-2、平滑肌肌动蛋白(SMA)和CD31表达，BrdU法检测细胞增殖活性，鉴定是否符合周细胞特征及纯化后的细胞是否具有增殖活性。结果 纯化后获取的细胞宽大扁平，形态呈梭形、三角形或多边形并有突起。细胞核椭圆居中，多为单核，偶为双核，细胞质丰富，无接触性抑制生长，符合周细胞形态及生长特征。NG-2和SMA免疫细胞化学染色阳性表达，CD31免疫细胞化学染色阴性表达，符合周细胞特点。分离纯化后的细胞48、72 h细胞增殖率分别为(0.37±0.11)%、(0.42±0.10)%。结论 免疫磁珠法可使周细胞从细胞成分复杂的肾组织中分离出来，并具有生物活性，可继续体外培养，为后续研究提供参考依据。

    免疫磁珠法； 周细胞； 肾小管； 分离和提纯

    血管周细胞又称Rouget细胞，是由Zimmermann于1923年首次提出，紧邻内皮细胞，生理情况下与内皮细胞一起维持着内环境稳定[1]。周细胞存在于血管管壁，在不同器官中数量存在明显差异，视网膜中分布较多，肾小管周毛细血管中也有发现。有文献报道，有关在肿瘤和视网膜病变中周细胞较多，少数器官纤维化病变中偶见报道[2]。有学者提出肾间质纤维化发生机制与周细胞-间叶细胞转分化相关[3]，该观点一经提出便吸引众多学者目光。周细胞在肾脏病变中的研究多处于体外实验阶段，这就需要纯净的、具有生物活性的周细胞作为实验基础，目前，没有商品化的周细胞株出售，给研究带来不便，所以找到一种可行、高效的获取周细胞的方法是解决研究的首要问题。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 选取健康BALB/c乳鼠(由成都中医药大学实验动物中心提供)30只，每只约3 g，雄雌不限。

    1.1.2 试剂及仪器 DMEM/F12培养基(赛默飞世尔生物化学制品有限公司)，进口胎牛血清(美国Sigma公司)，Ⅰ型胶原酶(美国Sigma公司)，胰酶细胞消化液(上海碧云天生物技术研究所) ......