叶合敏，李帅，向洋，付豪，杜永洪

    (重庆医科大学生物医学工程学院/省部共建国家重点实验室培育基地/重庆市超声医学工程重点实验室，重庆400016)

    不同浓度白色念珠菌连续培养对比观察*

    叶合敏，李帅，向洋，付豪，杜永洪△

    (重庆医科大学生物医学工程学院/省部共建国家重点实验室培育基地/重庆市超声医学工程重点实验室，重庆400016)

    目的通过对比观察白色念珠菌(白念珠菌)在LB营养琼脂培养平板上不同浓度的生长情况，探讨白念珠菌平板稀释法计数的适宜观察浓度。方法将白念珠菌原液稀释至约1.5×109cfu/mL，编号为A。然后取7个20 mL的无菌试管，每个试管加入9 mL无菌生理盐水，分别编号为B～H。从A试管中吸取1 mL菌液至B管，混匀后再吸取1 mL至C管，如此连续倍比稀释至H管。用移液枪吸取100 μL不同浓度的白念珠菌悬液到对应编号的一次性琼脂培养平板，用接种环涂抹均匀，置于37℃孵箱内培养。结果培养48 h后，浓度数量级为104的白念珠菌较浓度数量级为102、103菌体密集且体积小，而105较104更密集、体积更小，呈针尖状，肉眼不易观察具体形态。白念珠菌浓度数量级为102、103时，真菌数量为20～300个，可以计数，而浓度数量级达104及以上时，则不能计数。分别培养24、48、72 h后取出琼脂培养平板观察，培养24 h后肉眼可观察到菌落，但具体形态不明显；培养48 h后较24 h时体积大，大致形态可看出，呈乳白色圆形或卵圆形，表面光滑湿润，有光泽，直径为1.0～2.0 mm；培养72 h后较培养48 h后体积稍大，但呈现黄色。结论

    菌液浓度为1.5×102cfu/mL时可以作为平板稀释法的适宜计数浓度，培养48 h后为菌落形态观察的最佳时机。

    白念珠菌；集落计数，微生物；体外研究；培养基；琼脂

    白色念珠菌(白念珠菌)因各种原因引起的机体免疫力下降或菌群失调时，可引起假丝酵母菌病。白念珠菌为最常见的真菌致病菌[1]，致病机制尚未明确，初步认为白念珠菌致病力与其黏附能力、形态转变、产生有毒性的多种酶、产生抑制免疫活性细胞趋化作用的代谢产物有关[2]。目前，对白念珠菌引起的相关疾病主要通过药物治疗，但存在毒性反应大、治疗周期长、易产生耐药性等缺点[3]。通过对白念珠菌的培养，可了解其生长周期与基本特性，为确定白念珠菌在营养琼脂培养平板上培养的最适观察时间及其平板稀释法最理想计数浓度提供条件，也为体外研究治疗白念珠菌疾病的新方法提供支持。

    1 材料与方法 ......