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编号:362228
电针通过抑制AQP4表达减轻局灶脑缺血/再灌注大鼠脑水肿损伤及星形胶质细胞激活*
鍏抽敭璇嶏細1材料与方法,2结果,3讨论

     卞炜,秦文熠(.重庆市永川区中医院康复科4060;.重庆医科大学附属第一医院中西医结合科,重庆 40006)

    脑水肿损伤是缺血性脑血管疾病潜在的一种严重并发症[1],而脑水肿是引发大面积脑梗死高死亡率和高致残率的重要原因[2]。研究表明,水通道蛋白4(AQP4)是中枢神经系统最主要的水通道蛋白,广泛存在于星形胶质细胞[3],其在脑缺血所致脑水肿的发病机制中占据着重要地位[4]。星形胶质细胞作为中枢神经系统的主要支持成分,在脑缺血发生后,过度激活的星形胶质细胞可通过释放谷氨酸[5]、促炎性细胞因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)等[6]分泌加重再灌注损伤。研究表明,AQP4不仅可介导星形胶质细胞调节水在脑、血管和脑室之间的交换,还参与了脑缺血发生后星形胶质细胞的激活[7-8]。针刺作为中国传统的非药物治疗手段,对脑缺血/再灌注炎性损伤具有显著的临床效应[9],但其抗炎机制尚不明确。本研究着重探讨电针能否通过调节AQP4的表达减轻脑水肿及星形胶质细胞活化,以期深入探讨电针治疗减轻局灶脑缺血/再灌注后脑损伤的可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠60只,体重250~300 g,由重庆医科大学动物中心[SCXK(渝)2012-0002]提供。

    1.1.2 主要试剂与仪器 AQP4多克隆抗体(Abcam公司)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)多克隆抗体(Abcam公司)、免疫荧光定量PCR相关试剂(Takara公司)、AQP4、GFAP引物(上海生物生工有限公司合成)、G6850型电针治疗仪(北京精工仪器厂)。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组及模型建立 将60只大鼠分为正常组(NC组)、模型组(tMCAO组)、模型+电针治疗组(EA组)、模型+电针+AQP4特异性拮抗剂TGN-02组(TGN-02组),每组15只。采用改良线栓法[10-11]规范化制备大鼠右侧大脑中动脉缺血/再灌注模型,缺血时间为90 min。TGN-02组大鼠于造模前腹腔注射AQP4特异性拮抗剂TGN-02,剂量为 200 mg/kg[12]。

    1.2.2 电针刺激 EA组与TGN-02组参照中国针灸学会实验针灸委员会实验动物穴位图谱,选取大鼠“百会”穴及左侧“四关”穴为电针穴位,电针频率为2/20 Hz,波型为疏密波,强度以大鼠肢体轻微震颤为宜。EA组与TGN-02组首次电针刺激于再灌注后1 h进行,刺激时间每次20 min ......

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