布鲁氏菌外膜蛋白Omp16的原核表达、纯化及多克隆抗体制备*
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熊流新 ,黄 健 ,2,张 涛 ,李晓婷 ,徐 梅 ,陈昱希 ,陈安林 ,2,胡永林 ,2,闵 迅 ,2△(.遵义医学院检验医学院,贵州遵义563099;2.遵义医学院附属医院医学检验科,贵州遵义563003)
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人畜共患疾病。该病在临床上以长期发热、多汗、关节损害、淋巴和肝、脾大为主要症状,其病程进入慢性期则可能导致多器官不可逆损害[1]。据WHO统计,全球每年有超过50万新发病例[2]。近年来,该病发病例数及流行范围不断扩大,为世界公认危害公共卫生安全最大的传染病之一[3]。临床上主要以多西环素联合利福平或链霉素治疗为主[4]。近年来,对利福平耐药布鲁氏菌的相关报道正逐年增多,这给该病积极、有效的治疗带来严峻挑战[5]。因此,布鲁氏菌疫苗的相关研究正成为一种积极、有效的预防手段。
目前,布鲁氏菌活疫苗主要分为2类,一类是减毒光滑型疫苗,主要包括羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株、牛种布鲁氏菌S19疫苗株、猪种布鲁氏菌S2疫苗株,其含有的脂多糖(LPS)成分能刺激免疫细胞产生良好的保护作用[6]。但该类疫苗往往由于LPS O-侧链能刺激产生非特异性抗体,导致临床无法鉴别免疫接种与野生株感染。此外,其还存在较严重的毒力返祖现象,以致动物流产及播散性感染等情况的发生[7]。另一类是减毒粗糙型疫苗,主要包括牛种布鲁氏菌R型45/20和RB51。其通过反复传代减毒获得,由于该疫苗本身不含LPS O-侧链,所以不会干扰常规血清学检查[8]。但其也存在免疫保护效果差,疫苗菌株不稳定从而出现粗糙型菌株转变为光滑型菌株,并恢复强毒性等现象[9]。因此,研发免疫原性强、安全性好、价格低廉的布鲁氏菌蛋白质疫苗正成为当前的研究热点。
蛋白质疫苗具有免疫原性高、保守性好、能覆盖绝大多数血清型及生产成本低廉等诸多优点[10]。TABYNOV等[11]研究证实,将布鲁氏菌外膜蛋白Omp19制成的蛋白质疫苗诱导小鼠刺激CD4+T和CD8+T细胞产生干扰素γ(INF-γ),并且攻毒保护力能够达到牛布鲁氏菌S19疫苗株的水平。KIM等[12]研究BCSP31(布鲁氏菌31 000的外膜蛋白)、Omp3b和Cu-Zn SOD(铜-锌超氧化物歧化酶)作为蛋白质疫苗能引起强烈的Th1型免疫反应,显著提高IFN-γ及肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平,激活巨噬细胞参与的细胞免疫。这些蛋白质在所构建的动物模型中均具有不同程度的保护效应。Omp16是布鲁氏菌重要的毒力因子。研究证实,布鲁氏菌在敲除Omp16后,影响了外膜肽聚糖的连接,致使布鲁氏菌外膜结构受到破坏 ......
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