饶显浪，邓述恺(西南医科大学附属第一医院呼吸内一科，四川泸州646000)

    肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，腺癌是其最主要的组织学类型，吉西他滨主要用于非小细胞肺癌一线化疗及维持治疗用药。近年来，相关研究表明，谷氨酰胺具有一定的抗肿瘤作用，谷氨酰胺联合化疗可增强化疗药物对肿瘤细胞的作用。有研究表明，X?连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在多种恶性肿瘤细胞中高表达，具有抑制肿瘤细胞凋亡、降低肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用[1]。本研究探讨了体外谷氨酰胺联合吉西他滨对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及对XIAP表达的影响，旨在为肺癌化疗提供更有效的方案及理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 人肺腺癌A549细胞株为西南医科大学附属第一医院肿瘤科赠送，吉西他滨购自江苏豪森药业股份有限公司(批号：150804)，谷氨酰胺、胚牛血清、胰酶、CCK?8试剂盒均购自中国碧云天生物技术有限公司，达尔伯克孜良伊格尔哈姆F?12培养基(DMEM/F?12)购自吉诺生物医药技术有限公司，膜联蛋白 V?异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V?FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒购自天津三箭生物技术有限公司，XIAP试剂盒购自深圳子科生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 抑制浓度选取 吉西他滨浓度根据前期预实验结果及查阅文献[1?2]得到人非小细胞肺癌的半数抑制浓度为0.01 mg/L，选取半数抑制浓度作为实验浓度。谷氨酰胺浓度根据前期实验结果选取最佳抑制浓度32 mmol/L为实验浓度。

    1.2.2 细胞培养及分组 用含10%胚牛血清、100μg/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的DMEM/F?12培养液培养人肺腺癌A549细胞，置于含5%二氧化碳、37℃细胞培养箱中培养，取对数生长期细胞用于实验。设置空白对照组(无药物干预)、吉西他滨组(0.01 mg/L)、谷氨酰胺组(32 mmol/L)、联合用药组[谷氨酰胺(32 mmol/L)联合吉西他滨(0.01 mg/L)]，分别培养 24、48、72 h 进行实验。

    1.2.3 CCK?8法检测细胞增殖抑制率 取对数生长期的人肺腺癌A549细胞，按每孔1×104个细胞接种到96孔板，每孔加100 μL，贴壁后按实验分组进行处理，分别加入吉西他滨(0.01 mg/L)、谷氨酰胺(32 mmol/L)及吉西他滨(0.01 mg/L)联合谷氨酰胺(32 mmol/L)作用24、48、72 h，每组重复 5 孔，同时，设置对照组。各孔加入CCK?8试剂盒试剂0.01 mL ......