宋 君，王艳杰(辽宁中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，辽宁沈阳110847)

    有学者认为，脾气虚证涉及现代医学包括消化、免疫、循环、内分泌及自主神经等多系统功能的紊乱和失调。脾的主要功能是运化，脾将饮食水谷转化为精微物质，并输送至全身，濡养各个器官及组织。因此，脾气虚证发生机制的最基本内涵所在是脾失运化，主要体现在物质能量转化及利用的环节上，即脾气虚弱时，脾的运化功能失常，将导致能量代谢障碍[1]。

    葡萄糖是心肌的主要能量来源，心肌能量代谢的主要底物之一。葡萄糖通过细胞膜进入细胞内是心肌细胞利用葡萄糖的第一步，是细胞利用葡萄糖的主要限速步骤。葡萄糖要依靠细胞膜上的葡萄糖转运体(GLUTs)才能进入细胞内，葡萄糖转运体4型(GLUT4)是心肌细胞最主要的GLUTs，在心肌葡萄糖的跨膜转运中起着决定性作用。基于GLUT4在心肌细胞利用葡萄糖过程中的重要作用，脾气虚证是否可以影响GLUT4的表达，从而导致葡萄糖转运异常呢？

    为此，本实验将通过建立脾气虚大鼠模型，并用四君子丸对其进行治疗，采用分子生物学实验方法检测脾气虚大鼠心肌细胞GLUT4 mRNA及其蛋白的表达，并探讨脾气虚时GLUT4的表达变化及四君子丸对其干预作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂 苯甲基磺酰氟(PMSF，博士德)；RIPA组织细胞裂解液(Solarbio)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；化学发光底物(Thermo)；一抗稀释液(Beyotime)；一抗(北京博奥森生物技术有限公司)；二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)；荧光定量 PCR(qPCR)试剂盒(Takara)。

    1.1.2 药品 四君子丸(湖北广仁药业有限公司)。将四君子丸研磨成粉末，按照四君子丸粉末与蒸馏水1∶1.5(W∶V)的比例配制成悬浊液，以备后用。

    1.1.3 仪器 Vevo2100型高分辨率小动物专用超声影像系统(Visualsonics)；7500 qPCR 仪(Applied Biosys?tems)；Biospec?Nano型紫外可见分光光度计(岛津公司)；冷冻离心机(Thermo)；Trans?Blot SD 半干转印、垂直板电泳装置(Bio?Rad)；FA2004精密天平(上海佑科仪器仪表有限公司)。

    1.1.4 实验动物 雄性SD大鼠24只，体重(200±10)g，由本溪实验动物中心提供，许可证号SCXK(辽)?2010?0001 ......