皮 卓，聂义丹，陈 鹏，袁守军，王 毅(.新疆医科大学附属肿瘤医院泌尿科，新疆乌鲁木齐8300；.军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京00850；3.南华大学，湖南衡阳400)

    肾细胞癌是起源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤，占肾脏恶性肿瘤的80%～90%，是泌尿系常见的恶性肿瘤之一[1]。肾癌的治疗方式主要有手术切除、免疫治疗、分子靶向药物治疗等。目前分子靶向治疗是中晚期肾癌重要的治疗方案，但多重耐药成为限制分子靶向药物提高晚期肾癌患者缓解率和无进展生存率的主要原因。近年来，不同作用靶点的分子靶向药物、化疗药物与分子靶向药物的联合研究备受关注，以期提高药效，延缓肿瘤耐药性的出现。

    肿瘤干细胞理论认为，肿瘤增殖、侵袭、转移、耐药及复发等的根源是肿瘤干细胞。临床上常用的抗肿瘤药物可能对肿瘤中快速增殖及分化大部分肿瘤细胞具有杀伤作用，但肿瘤干细胞可以使肿瘤再生，导致治疗失败。该理论也可以解释索拉非尼在肾癌治疗初期有效，但无法根除肿瘤，最终出现肿瘤复发及转移。GUP?TA等[2]在对16000多种化合物进行高通量筛选实验中发现，盐霉素可以选择性地降低乳腺癌干细胞的活性，相关研究也证实盐霉素对肺癌、胃癌、胰腺癌、子宫内膜癌等多种肿瘤干细胞均具有明显的杀伤作用[3?6]，这也让盐霉素具备成为抗肿瘤药物的潜力[7]。基于肿瘤干细胞理论，本研究将盐霉素与索拉非尼联合使用，探讨盐霉素能否增强索拉非尼对人肾癌细胞KCC853的杀伤作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 受试细胞株 人肾癌细胞KCC853，购自北京协和细胞库，本实验室传代培养。

    1.1.2 试药与主要试剂 盐霉素标准品(规格：每支0.2 g，由山东鲁抗医药集团提供；索拉非尼原料药，批号：475207?59?1，由军事医学科学院二所9室惠赠，纯度为99.81%；RPMI1640(Gibco BRL公司)；二甲基亚砜(DMSO)、四氮唑蓝、Annexin Ⅴ、PI(Sigma?Aldrich 公司)。

    1.1.3 仪器 Multiskan Ascent酶标仪(芬兰Thermo?Labsystem公司)；CO2培养箱(B16HF，德国贺立氏仪器公司)；倒置显微镜(XDS?1B，重庆光电公司)；涡旋振荡仪(德国Eppendorf公司)；流式细胞分析仪(美国BD/Beckman/德国 Guava公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及药物处理 将人肾癌细胞KCC853加入RPMI?1640培养液(内含10%小牛血清) ......