李仕强，罗 亚，廖东平，陈晓东，张 海(重庆市九龙坡区第二人民医院400052)

    肝癌是恶性程度很高的肿瘤，死亡率仅次于胃癌，居我国癌症死亡率第2位[1]。近年来包括热消融、经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)、索拉非尼等多种治疗发展迅速，但手术切除依然是肝癌治疗的最主要手段，缺乏有效的手术切除后预后的预测指标依然是肝癌综合管理中的难点。

    腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是细胞能量代谢的感受器，是链接代谢和细胞信号通路的枢纽，AMPK通过磷酸化激活，磷酸化的AMPK(p?AMPK)可调节自噬、细胞周期、凋亡、蛋白合成和脂肪酸合成等多种细胞生物学行为[2]。最新的研究发现，p?AMPK与肿瘤的发生、发展密切相关，但p?AMPK是否可作为肝癌术后预测预后的因素少有报道。本研究旨在收集肝癌术后病理标本，研究p?AMPK在肝癌组织中的表达，并通过长期随访观察p?AMPK与肝癌预后的关系。

    1 资料与方法

    1.1 病例纳入与排除标准 纳入标准：(1)2013年5月至2015年5月在本院诊断为“原发性肝癌”；(2)在本院行肝叶切除术；(3)病理诊断为肝细胞性肝癌。

    排除标准：(1)非首次行肝叶切除术；(2)术前曾接受TACE或热消融治疗；(3)临床资料不完整；(4)无可用的肝癌组织石蜡标本。

    本研究所有患者均在术前签署知情同意书，并经本院伦理委员会审核批准。病理诊断结果经2名以上病理医师确认。

    1.2 标本来源 相应的肝癌石蜡标本从病理科提取并切片。

    1.3 试剂 p?AMPK(Thr172)抗体(CST：8208)，免疫组织化学(SP)试剂盒(北京中杉金桥：SP9001)。

    1.4 方法

    1.4.1 检测p?AMPK的表达情况 采用SP法，具体步骤如下：65℃烤片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，3%过氧化氢阻断灭活内源性过氧化物酶，抗原修复，山羊血清封闭，一抗4℃断灭活内源性过氧化物酶，抗原辣根过氧化物酶标记的二抗，二氨基联苯胺显色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。每例切片随机选取5个高倍镜视野进行结果判定，2位经验丰富的病理科医师采用双盲法观察。结果评分：(1)染色深度，无阳性染色为0分 ......