卢杰，邓珊珊，姜世君，江荣科(.大庆医学高等专科学校，黑龙江大庆633；.大庆龙南医院，黑龙江大庆633)

    早期发现癌症，筛查非常重要，但传统肿瘤标志物缺少所需灵敏度。据文献报道，存活素(Survivin)主要分布于大多数常见肿瘤组织内，在肿瘤的诊断中具有重要作用。Survivin蛋白有2种具有不同抗凋亡特性的新的Survivin剪接变异体，一种是缺乏外显子3的Survivin-△EX3；一种是保留了部分内含子2作为隐性外显子的Survivin-2B。通过转染实验研究2种剪接变异体对凋亡的调控发现，Survivin-△EX3保留了抗凋亡特性，而Survivin-2B的抗凋亡能力明显降低。Survivin可用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测，qRT-PCR采用独特封闭反应，减少了污染，可靠性高，且操作时间短。本研究应用qRT-PCR检测了肺癌、乳腺癌、结直肠癌和胃癌患者外周血Survivin及其剪接变异体——Survivin-△EX3、Survivin-2B mRNA表达量及检出率，探讨了作为肿瘤标志物的外周血Survivin及其剪接变异体诊断早期癌症是否更为灵敏，旨在为进一步早期癌症的筛查提供理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 材料与仪器 总RNA抽提试剂购自美国Invtrogen公司，逆转录酶、DNA分子标准2000均购自宝生物工程(大连)有限公司，RNA抑制剂、6×上样缓冲液均购自美国Fermentas公司，荧光核酸凝胶染料购自美国Biotium公司，超纯水购自韩国BIONEER公司，qRTPCR 8联管购自美国BIO-RAD公司，PCR引物由北京擎科生物工程有限公司合成，2720型PCR仪购自美国ABI公司，四通道qRT-PCR仪购自美国BIO-RAD公司。

    1.2 方法

    1.2.1 样品采集 2013—2015年采集大庆龙南医院新入院且未进行放、化疗或手术治疗的90例肿瘤患者静脉血，以乙二胺四乙酸二钾抗凝管采集抗凝血，其中乳腺癌患者22例，肺癌患者23例，结直肠癌患者23例，胃癌患者22例。另采集30例职工体检者静脉血作为对照组。90例肿瘤患者均经病理类型组织细胞学、影像学、临床表现等确诊。

    1.2.2 引物设计 应用Primer premier5.0软件设计并合成特异性引物。见表1。 ......