杨 琨，李 骏，丰奇昊，沈梦杰，陈谦谦，罗雅馨，刘 琪△，温秀杰(.遵义医科大学附属口腔医院牙周科，贵州遵义 563000；.遵义医科大学附属口腔医院种植科，贵州遵义 563000；3.陆军军医大学大坪医院口腔科，重庆 40004)

    颅神经嵴来源的外胚间充质干细胞(EMSCs)，是除牙釉质以外所有牙齿组织的生成细胞，被认为是牙源性干细胞的始祖细胞。在胚胎发育过程中由颅神经嵴迁移至上、下颌突，与牙源性上皮相互作用形成牙囊和牙乳头，进而分化为多种牙齿组织生成细胞，形成牙本质、牙髓、牙骨质、牙周膜和牙槽骨[1]。牙源性的EMSCs在牙齿发生、发育过程中起着至关重要的作用，并具有向多种牙齿组织细胞分化潜能的特点。2004年，国内学者分离并成功培养出第一腮弓来源及颌突来源的颅神经嵴源性EMSCs[2?3]，使研究者对牙胚发育时期的始祖细胞研究有了长足的发展。针对EMSCs的研究发现，在体外培养过程中，EMSCs能够自然向成骨细胞及平滑肌细胞分化，细胞的成分比较复杂，不太适合作为单纯来源的组织细胞进行研究[4]。

    但是，以往的研究已经认为p75神经营养因子受体(p75NTR)是神经嵴源性干细胞的特异性表面标志物[5]。因此，前期研究对牙胚来源的EMSCs用p75NTR抗体进行流式分选与纯化，获得了细胞形态较为均一，代表高纯度神经嵴源性的p75NTR阳性EMSCs(p75+EMSCs)，为研究牙齿发生、发育机制提供了一个良好的体外细胞模型[6]。进一步研究显示，p75+EMSCs体外未发现明显的自然分化迹象，且其增殖能力强、稳定，显示了其较适合作为种子细胞应用于牙组织工程[7?8]优势。并且有前期研究还证明，p75NTR与Mage?D1的结合能够影响EMSCs的矿化能力[9]，这就进一步引发了作者的思考：牙齿发育过程中形成的周期性矿化间隙纹路—牙体硬组织生长线的形成机制是否受到p75NTR的调控。

    1 材料与方法

    1.1 一般材料 DMEM?F12培养基、胰酶(Gibco，美国)，胎牛血清(Gibco，美国)，鼠抗人 CD14、CD29、CD44、CD45、CD90、CD105、CD146、CD166，p75NTR 单克隆抗体(Abcam，美国)，细胞RNA提取试剂盒、RT?PCRmix试剂盒(Takara ......