何 珍综述，王 璞审校(重庆医科大学附属第一医院呼吸内科，重庆400016)

    结核病是结核分枝杆菌感染引起的呼吸道传染病，是全球单一病原体感染导致死亡的第九大原因，位于人类免疫缺陷病毒(HIV)∕艾滋病之前。2016年，全球新发结核病例近1 040万例，其中56%在印度、印度尼西亚、中国、菲律宾、巴基斯坦。约60万新发结核病例对利福平耐药，其中49万例为耐多药结核(MDR-TB)。47%的患者主要分布在印度、中国和俄罗斯；估计有近170万例患者死于结核病[1]。早期、准确、快速诊断结核是防治的关键。近年来，结核实验室诊断技术通过不断创新取得了新的进展。2017年11月新发布的《WS288-2017肺结核诊断标准》更对肺结核诊断标准做出重大调整，本文就近年来结核实验室诊断技术的进展作一综述。

    1 细菌学检测

    1.1 涂片镜检

    1.1.1 改良抗酸染色 分枝杆菌抗酸染色法快速、简易、价廉，仍为目前应用最广的结核检测方法。该方法主要分为7个步骤：玻片处理、标本收集、标本固定、复红染色、酒精脱色、美兰染色、镜检观察。对任一步骤改进均可提高检测效率。CHEN等[2]采用粟氏FMMU6型拨片离心沉淀仪处理脑脊液，再用多聚赖酸处理过的玻片收集其中的白细胞并用TritonX-100处理，增加了细胞壁对染色剂的通透性，使胞内菌着色更好，显著提高了检出率及敏感性。邹月丽等[3]采用改良抗酸染色对脑脊液进行检测，将阳性率由10.00%提高至88.57%。张继萍等[4]采用传统及改良抗酸染色法对菌阴结核支气管肺泡灌洗液进行检测，阳性率分别为38%、82%。

    1.1.2 荧光染色 利用结核分枝杆菌的嗜酸性及对荧光染料的亲和性，以石炭酸为媒染剂加入染色液中，使分枝杆菌染上荧光。痰结核分枝杆菌在荧光显微镜20～40倍物镜暗视野下呈亮绿色荧光，与暗色背景反差明显；在100倍油镜下呈杆状或短棒状，极易被发现，不易漏检[5]。对于某些患者因长期服用药物，使抗酸性遭到破坏的结核分枝杆菌，其荧光性仍可保留，虽抗酸染色阴性，但在荧光染色后呈阳性[6]。荧光染色较抗酸染色阳性率高，尤其适用于病变活动轻、排菌量较少的患者[7-8]。近年来，LED荧光显微镜的出现，推动了荧光染色镜检的应用。与传统的汞灯光源相比，其阅片效果好、阅片时间短、操作方便 ......