郭君燕 综述，戴一扬 审校

    (浙江大学医学院附属第四医院，浙江 义乌 322000)

    消化道肿瘤是临床常见的一大类肿瘤，在全球发病率前十位的肿瘤中占50%，且死亡人数均较高[1]，因此，早期诊断消化道肿瘤对于改善预后、减轻社会压力和疾病负担具有重要意义。外周血游离核酸(ccfNAs)是指存在于人体血液循环中的游离于细胞外的微量内源性或外源性核酸片段，包括循环游离DNA和循环游离RNA等，本文将从上述2个方面入手，对ccfNAs在消化道肿瘤诊断方面的应用做一综述。

    1 循环游离DNA

    1.1概述 1948年，MANDELD等[2]首次发现，在血浆和血清中存在着游离DNA(cfDNA)。cfDNA是一种胞外DNA，主要来自于细胞的坏死和凋亡，在外周血中的水平随着年龄的增长而增加，且当机体处于某些疾病或特殊状态如创伤、脓毒症、无菌性炎症、氧化应激、运动、肿瘤等情况时也可升高[3]。在cfDNA中存在着一类位于血液循环中的来自肿瘤基因组的DNA片段，称为循环肿瘤DNA(ctDNA)。ctDNA仅占cfDNA的一小部分(有时小于0.01%)，半衰期通常小于2 h，主要来源于凋亡或坏死的肿瘤细胞、肿瘤细胞释放DNA入血及循环肿瘤细胞裂解等途径，可携带有突变、插入、缺失、重排、拷贝数异常和甲基化等基因变异特征[4]。

    1.2分离与检测 cfDNA在血清中的含量远高于血浆，但由于易受到基因组DNA(gDNA)的污染，现有的证据更推荐将血浆作为分离检测的最佳标本[5]，其分离方法有相分离法、基于硅膜的离心柱法和基于磁珠的分级筛选法。

    目前,已有研究表明，在消化道肿瘤患者的外周血中可以检测到cfDNA且与健康人群相比存在着DNA片段的差异[6]。其检测方法通常包含两大类：一类是以聚合酶链式反应(PCR)为基础的数字PCR(dPCR)、微滴式数字PCR(ddPCR)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、乳液微滴数字分析技术(BEAMing)等 ......