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编号:355312
Wnt5a基因慢病毒的构建与RSC96雪旺细胞的感染研究*
http://www.100md.com 2022年3月3日 现代医药卫生 2022年第4期
病毒感染,载体,通路,1材料与方法,2结果,3讨论
     韦良臣,杨 琪,曾 晖,翁 鉴,刘 佩,康 斌,钟华戈,于 斐△

    (1.北京大学深圳医院骨关节科,广东 深圳 518036;2.骨科生物材料国家地方联合工程研究中心,广东 深圳 518036;3.北京大学深圳医院超声诊断科,广东 深圳 518036;4.广西医科大学附属肿瘤医院胃肠外科,广西 南宁 530021)

    周围神经损伤是指周围神经干及其分支受到直接或间接创伤后发生的损伤,常见于体力劳动者,致伤原因包括解剖性原因和损伤性原因。解剖性原因是解剖异常引起周围神经的卡压性损伤;损伤性原因主要由于机械性原因(切割、挤压)、物理性原因(冻伤、烫伤)、缺血性原因(栓塞)、医源性原因(注射、手术)及代谢、肿瘤等造成[1],可导致躯体的运动、感觉及自主神经功能障碍等一系列症状。周围神经损伤的治疗效果常难以估计,受到损伤部位、损伤原因、机体状况等多种因素影响,若治疗不及时,往往会导致不良后果,严重者甚至会导致残疾,这使得周围神经损伤成为骨科医生的棘手问题。周围神经损伤可通过药物、电刺激等非手术方法和手术方法治疗[2]。随着医学发展,越来越多的神经相关因子被证实与周围神经损伤修复相关,例如传统的神经生长因子、睫状神经生长因子、转化生长因子等[3],均可促进周围神经损伤后的修复。许多新的因子也能有效实现功能,例如Wnt5a因子[4]。

    Wnt5a因子是非经典Wnt信号通路的代表性配体,首先于20世纪90年代被发现,其基因含有5个外显子,起始的631 bp有很强的启动子活性[5]。研究显示,Wnt5a因子可以通过自身所在的非经典Wnt信号通路、核因子-κB(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等[6],参与到骨科相关疾病如周围神经损伤、骨关节炎、骨缺损修复等[7]的进程中。雪旺细胞是周围神经系统中的神经胶质细胞,延神经元的突起分布,包裹在神经纤维上形成有髓神经纤维,是周围神经疾病中研究较多的一种细胞。RSC96细胞是一种细胞系,经大鼠原代培养的雪旺细胞长时间培养后自发转化而形成,呈贴壁样生长,能够表达原代雪旺细胞的部分特性,常常用于周围神经损伤相关的疾病研究中,以代替原代雪旺细胞。

    慢病毒载体是以人类免疫缺陷Ⅰ型病毒为基础发展起来的一种病毒载体,对多种细胞均具有感染能力,被广泛应用于表达RNAi的动物及细胞实验中。该病毒可以将外源性基因稳定地整合到宿主细胞的染色体上,从而形成可以传代且表达稳定的外源性基因子代细胞,与只能实现瞬转的逆转录病毒载体比较有较大优势,也较多地被应用于骨科相关研究中[8]。目前,少见学者对RSC96雪旺细胞中应用Wnt5a基因慢病毒进行感染的细胞模型进行报道 ......

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