刘茂希，杜昆利

    (1.山西省肿瘤医院结直肠外科，山西 太原 030013；2.第四军医大学附属西京医院消化外科，陕西 西安 710032)

    结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，其严重危害着人类健康。以手术为主的综合治疗明显改善了结直肠癌的生存率，但是其总体生存率仍有待提高，因此寻找新的结直肠癌治疗方案迫在眉睫。探讨结直肠癌的发病机制，寻找结直肠癌的治疗靶点是目前的研究热点之一。磷脂酶D2(PLD2)作为PLD家族的重要成员之一，在多种肿瘤中发挥了重要作用。课题组前期研究发现PLD2在结直肠癌组织中的蛋白和mRNA表达水平升高，并且其与结直肠癌患者的肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、生存率等相关[1]，且其在结直肠癌中起到抑制凋亡的作用[2]。然而在体内实验中，干扰PLD2基因表达是否对结直肠癌的生长有影响，目前尚鲜见相关报道。本实验拟通过构建结直肠癌裸鼠转移瘤模型，构建PLD2特异性小干扰RNA(ad-PLD2-siRNA)的表达载体注射裸鼠移植瘤，探讨应用RNA干扰法下调结直肠癌裸鼠移植瘤中PLD2表达水平对结直肠癌细胞生长的影响，期望能为结直肠癌的基因治疗提供依据。

    1 材料与方法

    1.1材料

    1.1.1动物 30只BALB/c雄性裸鼠，SPF级，鼠龄4～5周，体重16～20 g,由山西省肿瘤医院动物实验中心提供。

    1.1.2细胞和腺病毒 SW480和SW620细胞由本课题组前期冻存；ad-PLD2-siRNA腺病毒载体由上海汉恒生物技术有限公司构建和鉴定；本研究干扰PLD2有效的PLD2-siRNA靶序列为：5′-GAT GAG ATT GTG GAC AGA ATC CTG-3′。只带腺病毒载体而无有效序列的腺病毒作为阴性对照。

    1.1.3试剂 胎牛血清和RPMI1640；PLD2抗体(美国Abcam公司)；β-actin、c-Myc和Bcl-2抗体购自武汉三鹰生物科技有限公司；Trizol试剂盒、逆转录试剂盒、荧光定量反应试剂盒购自大连TaKaRa公司；蛋白提取试剂盒、蛋白浓度检测试剂盒、电化学发光(ECL)液及PVDF膜购自中国碧云天生物科技有限公司；裸鼠购自重庆医科大学动物实验中心 ......