张锡云，王爱秀，许 艳，路青云，崔毓城，陈苏玲，张慧云，杨 宁，田 园，李小娟，朱衍志△

    (1.兰州生物技术开发有限公司，甘肃 兰州 730046；2.甘肃省食品药品检定研究院，甘肃 兰州 730070)

    高效液相色谱法(HPLC)是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。HPLC仪器由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成[1]。目前，HPLC广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究及环境研究中。

    药用丁基橡胶塞作为常见的内包材之一，广泛应用于各类注射剂产品中[2-3]。橡胶中含有不饱和的双键,在使用过程中易被氧化，所以在生产过程中通常加入抗氧剂，常见的抗氧剂有抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076、抗氧剂168和抗氧剂BHT等。根据《化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则(试行)》[4]中塑料包装材料添加剂及限度要求，其中抗氧剂BHT添加量应不超过0.125%，其他抗氧剂添加量均应不得超过0.3%；每种包装材料中添加抗氧剂的种类不能超过3种，且总量不得超过0.3%。因此，本研究尝试建立了可同时测定这5种抗氧化剂的HPLC法，并采用该方法测定了胶塞中抗氧化剂向注射用A型肉毒毒素(BTXA)中的迁移情况。

    1 材料与方法

    1.1材料 抗氧剂1010(批号:5692-01)、抗氧剂330(批号：5691-01)、抗氧剂1076(批号：5691-01)、抗氧剂168(批号：5690-01)均购自美国AccuStandard公司；抗氧剂BHT(2,6-Di-ter-butyl-4-methylpheno)购自德国Dr.Ehrenstorfer GmbH公司，含量99.5%。BTXA(批号：试20191206-1、试20191206-2、试20191206-3)由兰州生物技术开发有限公司提供。

    1.2仪器与试剂 Thermo高效液相色谱仪(型号：UItiMate 3000)、DAD检测器、电子天平(型号：MS 205DU)。甲醇、无水乙醇、乙腈、四氢呋喃和二氯甲烷为色谱纯，试验用水为纯化水。

    1.3方法

    1.3.1色谱条件 色谱柱为岛津Inertsil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm ......