李晓俊，许玉杰

    (苏州大学附属独墅湖医院，江苏 苏州 215124)

    当今社会，恶性肿瘤已逐渐成为人类死亡的第一杀手，而肿瘤的治疗手段主要有手术、放化疗、生物治疗、免疫治疗等。目前临床上有超过一半的肿瘤需要接受放疗[1-2]，为了提高放疗效果，临床上常利用放射增敏药物来增强射线对肿瘤的杀伤作用。目前已有研究证实，硝基咪唑类药物[3-4]，如顺铂、吉西他滨、紫杉醇等化疗药物[5-7]；有些分子靶向药物，如表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(AKT)抑制剂[8-9]；以及有些合成纳米材料[10]、中草药[11]等也具有辐射增敏作用，但寻找新的具有放射增敏的药物一直是肿瘤放疗的研究方向之一。

    2，4-二硝基苯酚(DNP)是一种线粒体解偶联剂，其能通过抑制细胞腺苷二磷酸(ADP)的磷酸化，从而抑制细胞的能量代谢。肿瘤细胞是一种高耗能的细胞，而且肿瘤细胞受射线损伤后，其自身的增殖及对辐射损伤的修复都需要很大的能量。因此，设想通过使用DNP来抑制受损肿瘤细胞的修复，从而达到辐射增敏的效果。本文拟通过研究DNP对Hela及KB细胞的效应，评估该药是否具有辐射增敏能力，并且探讨其可能存在的相关机制。

    1 材料与方法

    1.1材料

    1.1.1细胞株 Hela细胞(宫颈癌细胞)、KB细胞(口腔上皮癌细胞)均购于中科院上海细胞库。

    1.1.2药物与试剂 DNP粉末购于武汉福德化工公司；改良型RPMI-1640培养基、青霉素链霉素双抗、DMEM高糖培养基均购于Hyclone公司；胎牛血清(Biological Industries)； 胰酶溶液(上海源培生物有限公司)；磷酸盐缓冲液(PBS)(自配)；MTT(Biosharp)；吉姆萨染色液(珠海贝索生物技术有限公司)；细胞周期检测试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒均购于江苏碧云天生物技术公司；电镜专用戊二醛(上海源叶生物公司)；锇酸(上海斯百全化学有限公司)；LC3B(LC3-Ⅰ/Ⅱ)(1∶1 000,ab48394,Abcam)；兔抗-LC3B-Ⅱ(1∶2 000，Abcam,ab48394)。

    1.1.3仪器 CO2恒温培养箱(Thermo公司)；X线辐照仪(RAD SOURCE RS2000 Pro Biological Irradiator)；手持式细胞计数仪(MILLIPORE公司)；多功能酶标仪(美国Biotek公司)；流式细胞检测仪(型号FACSVerse 美国BD)；透射电子显微镜(美国FEI公司) ......