李玉洁，杨雨婷，杨国平,2△

    (大理大学:1.基础医学院医学微生物学及免疫学教研室；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南 大理 671000)

    结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTB)感染引起的慢性传染病，也是单一感染性病原体导致的最大死因[1]。WHO在《2021年全球结核病报告》中估计，2020年全球新增TB病例987万例，因TB死亡病例达128万例，TB仍对人类生命健康造成严重威胁。因此，寻找MTB特异性抗原以用于早期免疫学诊断对于TB的防治意义重大[1]。PE/PPE蛋白是MTB独有的蛋白家族，参与MTB与宿主细胞间的相互作用，其编码基因约占MTB整个基因组的10%，对MTB的毒力、抗原变异及免疫逃逸作用至关重要[2]。Rv2107基因编码的PE22蛋白为PE蛋白家族成员之一，能够抑制巨噬细胞的凋亡，从而增强耻垢分枝杆菌在巨噬细胞中的存活[3]，且PE22/PPE36蛋白复合物可能共同分泌并定位于细胞表面，作为血红素受体发挥作用，竞争性地获取宿主细胞铁离子，最终有利于MTB的生长和致病[4]。上述研究表明，PE22可能作为MTB的毒力因子参与机体MTB感染过程中的抗原变异和免疫逃逸过程，但其生物学功能尚未得到证实。为此，本研究对Rv2107基因编码的PE22蛋白进行原核表达与生物信息学分析，为PE22蛋白在MTB感染过程中发挥的免疫学功能及作为疫苗候选抗原的研究提供基础。

    1 材料与方法

    1.1材料

    1.1.1菌株与质粒 卡介苗(BCG)菌株和pET-32a表达质粒均由大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室保存并提供。

    1.1.2主要试剂及仪器 大肠埃希杆菌(E.coli) DH5α菌株、E.coliBL21(DE3)菌株、DNA2000 Marker、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、DNA产物纯化试剂盒、质粒提取试剂盒与Pro-light辣根过氧化物酶(HRP)化学发光检测试剂均购于北京天根生化科技有限公司；pMD18-T载体购于北京Takara公司；T4 DNA连接酶购于上海Themo Fisher公司；限制性核酸内切酶EcoRⅠ、HindⅢ购于上海Fermentas公司；异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)、镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)、蛋白 Marker与小鼠抗组氨酸(his)标签抗体均购于北京Solarbio公司；HRP标记的羊抗鼠免疫蛋白G(IgG)购于北京中杉公司。HZQ-X500大型恒温振荡器购于上海一恒科学仪器有限公司；ABI 2720 PCR仪、Nanodrop 2000微量紫外可见分光光度计均购于上海Themo Fisher公司；5804R冷冻高速离心机购于德国Eppendorf公司；Scientz-ⅡD超声波细胞粉碎机购于宁波新芝生物科技股份有限公司；EV-180垂直电泳槽、Gel DocTMEZ全自动凝胶成像系统均购于上海Bio-Rad公司；Image Quant LAS 4000 mini化学发光成像系统购于杭州Ge Healthcare Bio Sciences Ab公司 ......