谭艳美,陈三俊,谭玉林,吴 智,蒙国照,谭艳飞

    (1.湘南学院基础医学院,湖南 郴州 423000;2.湘南学院生物医药微生物组学重点实验室,湖南 郴州 4230003.郴州市第一人民医院疼痛科,湖南 郴州 423000;4.郴州市第一人民医院内分泌糖尿病科,湖南 郴州 423000)

    脂噬是一种选择性的自噬进程,能有效识别并调控脂质代谢,选择性地将脂滴包裹在细胞溶酶体中,脂滴在溶酶体中被酸性脂肪酶降解后送至细胞外的高密度脂蛋白(HDL)中,进而促进胆固醇流出,维持脂质代谢的稳态[1-2]。有研究发现,脂噬减弱会促进动脉粥样硬化(AS)、糖尿病等代谢性疾病的发生和发展[3],也就是说,AS的发生很有可能与细胞内脂噬的减弱有关。

    围脂滴蛋白(perilipin2,PLIN2)是PAT家族中的成员之一,在AS发展进程中具有重要作用。有研究证明,PLIN2也可通过激活自噬和刺激胆固醇的外流影响人类对AS的易感性[4],同时在PLIN2缺陷的心肌细胞中,脂噬减弱引起细胞内甘油三酯蓄积[5]。

    脂质的异常蓄积是AS发生发展的关键环节,因此研究脂质蓄积的机制对防治AS具有重要意义。结合课题组前期对PLIN2在AS发生发展中的作用机制研究,本研究拟探讨PLIN2在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞形成过程中是否有抑制脂噬的作用,以期为AS的防治和机制研究提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1材料与试剂 RAW264.7巨噬细胞购自中科院上海细胞生物学研究所细胞库;DMEM 高糖培养基(Gibco,8122691);特级胎牛血清(武汉普诺赛生命科技有限公司,164210);oxLDL(广州奕元生物技术有限公司,YB-002);油红O(Sigma,SHBL1039);LC3A/B兔mAb(Cell Signaing Technology,12741);SQSTM1/p62 抗体(Cell Signaing Technology,5114);兔PLIN2的单克隆(Abcam,ab108323);GAPDH多克隆抗体(Proteintech,10494-1-AP);辣根过氧化物酶(HRP)-偶联亲和纯山羊抗兔IgG(proteintech,SA00001-2);特超敏电化学发光(ECL)试剂盒(Beyotime,P0018AM);LipofectamineTM3000(Thermo Fisher,L3000001);si-musPLIN2(HonorGene) ......