冯 霞,刘小云,许晶晶

    (徐州医科大学附属医院:1.中心实验室;2.检验科,江苏 徐州 221002)

    耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的广泛分布是对公共健康的巨大威胁,CRE的感染往往存在多药耐药,给临床抗感染治疗带来很大困难,对喹诺酮类抗菌药物的耐药是其中很常见的一种。喹诺酮类抗菌药物自问世以来,在肠杆菌科细菌感染的治疗中被频繁用到,也因此产生了比较普遍的耐药。关于喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究已经有很多报道,但是关于CRE对喹诺酮类药物的耐药机制报道并不多见。本研究通过分析质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)在CRE中的分布,探讨相关的耐药机制,为临床合理使用该类抗菌药物提供可靠的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1菌株来源 收集2021年7月至2022年9月本院临床分离非重复的43株CRE菌株,入选标准为对亚胺培南或美罗培南至少一种耐药。本研究涉及的标本均为临床标本的二次利用,不涉及医学伦理方面的问题。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。

    1.2仪器与试剂 VITEK-2 Compact 全自动微生物分析系统(法国生物梅里埃公司);聚合酶链反应(PCR)扩增仪ProFlex4483636(Applied Biosystems);电泳仪(北京六一仪器厂);凝胶成像分析系统GenoSens1880(上海勤翔科学仪器有限公司);基因扩增引物由上海捷瑞生物公司合成。2X Taq PCR MasterMix(VICMED),100 bp DNA Ladder[天根生化科技(北京)有限公司]。

    1.3药敏试验 采用VITEK-2 Compact 全自动微生物分析系统进行药敏试验和菌株鉴定,药敏试验结果参照临床和实验室标准化协会(CLSI)2021年的标准判断。

    1.4细菌DNA制备 煮沸法:取适量菌落加入100 μL无菌双蒸水,充分混匀后100 ℃煮沸15 min,迅速放冰浴10 min,冷却后12 000 r/min离心5 min,取上清液,-20 ℃保存备用 ......