张亚勤,杨 涵,龙丹丹,陈怡颖,王金凤,乔 宇,戴欢欢,苏 洪△

    (普洱市人民医院:1.生殖遗传中心;2.眼科,云南 普洱 665000)

    耳聋的发生与遗传因素和环境因素有关,约60%的耳聋患者是由遗传因素引起。在遗传性耳聋中,约80%为非综合征型耳聋(NSHL)。GJB2基因突变是NSHL的致病因素之一,其是最常见的耳聋基因。在GJB2基因中,目前在耳聋基因网站(https://deafnessvariationdatabase.org)已经更新300多种与听力损伤相关的致病性突变。GJB2基因的突变具有种族和地域特征,其突变种类多,且仍有新的突变在不断被发现。

    云南普洱地区由于具有众多的少数民族,而且较多少数民族世居于此,因此具有独特的民族特点和地域特点。目前国内的耳聋研究数据大多来自内地汉族人群,云南少数民族地区的研究数据较少。本研究通过分析云南普洱地区新生儿GJB2基因突变情况,旨在丰富本地区耳聋基因数据,为区域化开展耳聋基因检测、遗传咨询及预防干预提供重要信息。

    1 对象与方法

    1.1对象 选取2021年6月至2023年2月在普洱市人民医院产科出生的799例新生儿为研究对象,收集其足跟血样本,采用聚合酶链反应-碱基序列直接测序方法检测GJB2基因编码区,分析该区域基因多态性分布情况。本研究由普洱市人民医院医学伦理委员会批准许可,所有参与该研究的新生儿家属均签署了知情同意书。

    1.2方法

    1.2.1主要仪器与试剂 DNA提取试剂盒采用北京天根生化科技有限公司的干血斑基因组DNA提取试剂盒(DP334);聚合酶链反应主要采用TaKaRa公司的 Premix TaqTM(Ex TaqTMVersion 2.0 plus dye)试剂(RR902A),使用仪器为AB veriti DX梯度扩增仪;碱基序列直接测序由北京擎科生物科技有限公司昆明分公司完成,使用仪器为AB 3730XL型基因分析仪。

    1.2.2基因组DNA提取 由护士按照新生儿足跟血采集规范采集新生儿足跟血,制成4个血斑滤纸并晾干,保存于-20 ℃冰箱。检测时,用血片打孔器将血斑打孔得到3 mm直径的干燥血斑5～10片,用DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

    1.2.3检测方法 GJB2基因的编码区位于2号外显子,实验所用上游引物序列为5′-TCTTTTCCAGAGCAAACCGC-3′,下游引物序列为5′-TGAGCACGGGTTGCCTCATC-3′,扩增产物片段为776 bp,扩增产物覆盖全部编码区 ......