肝硬化、肝细胞癌中Sp1、c-fos的表达及意义
【摘要】目的：研究Sp1、c-fos在人肝硬化与肝细胞癌组织中的蛋白表达特征及在发病机制中的作用。方法：免疫组化方法检测肝硬化组织、肝细胞癌组织中Sp1、c-fos蛋白的表达。结果：Sp1、c-fos表达在肝细胞癌组织、癌旁组织中明显增高，；c-fos蛋白表达在肝硬化组织中表达增高；Sp1在肝硬化组织中表达微弱，与正常肝组织相比差异无统计学意义。结论：Sp1、c-fos与肝细胞癌的发生有关。Sp1未发现其与肝硬化的关系。c-fos提示其可能参与肝硬化的发生。
【关键词】蛋白表达；肝细胞癌；转录因子
【中图分类号】R657.3+1 【文献标识码】A 【文章编号】1009-6019(2009)-0013-1
前言
肝纤维化的发生机制涉及多种细胞因子表达的改变，而基因转录水平的调控可能在其表达中起到关键作用。在长期受损的肝脏，多种转录因子参与调控细胞外基质(ECM)蛋白的生成从而进行纤维修复的过程，这种反应的持续性导致了肝纤维化。肝细胞癌(HCC)的发生发展机制复杂，涉及多基因调控多信号通路，而基因转录水平的调控可能也在其表达中起到关键作用。大量实验研究表明转录因子Sp1、c-fos在多种肿瘤中有重要的作用。转录因子Sp1、c-fos在肝硬化、肝细胞癌中尚缺乏系统研究，我们就转录因子Sp1、c-fos在肝硬化以及肝细胞癌组织中的蛋白表达进行研究并探讨其机制。
, 百拇医药
材料和方法
1主要试剂：c-fos多克隆抗体Neomark公司EGFR多克隆抗体(兔抗) 、DAB溶液、苏木素染色试剂盒均由北京博奥森生物技术有限公司产品。
2标本收集收集2007年3月到2008年9月肝穿刺与肝细胞癌手术切除病理标本，共58例，其中肝细胞癌43例；肝硬化组织15例。另有正常供肝组织病理标本10例。入选标准：经病理检查均证实为肝硬化、肝细胞癌，免疫组化检测HBsAg均阳性；术前患者均未行化疗、放疗。
3免疫组化 ：免疫组化染色具体步骤严格按照试剂盒说明进行操作。染色结果判定标准：按细胞染色强度判为浅黄色(0分)、黄色(1分)及棕黄色(2分)3级。
4统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件包进行分析，组间采用非参数两个或多个独立样本检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
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结果
1、c-fos蛋白在正常肝组织、LC组织、癌旁组织、HCC组织中的表达情况
在43例HCC组织中，c-fos蛋白阳性表达率为83.7%(36/43)，其中弱表达和强表达者的比例分别占总病例数的58.1%(25/43)和25.6%(11/43)；35例癌旁组织中表达率为85.7%(30/35)；15例LC组织中表达率为66.7%(10/15)；10例正常肝组织中c-fos表达阳性率为30.0%(3/10)。c-fos蛋白在正常肝组织、LC组织、癌旁组织和HCC组织的表达情况。
2、Sp1蛋白在正常肝组织、LC组织、癌旁组织、HCC组织中的表达情况
在43例HCC组织中，Sp1蛋白表达阳性率为74.4%(32/43)，其中弱表达和强表达率分别为14.0%(6/43)和60.4%(26/43)；35例癌旁组织有14例(40.0%)Sp1阳性表达；15例LC组织中有2例弱阳性表达13.3%(2/15)；10例正常肝组织中Sp1蛋白表达均为阴性。
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讨论
1、c-fos蛋白在LC、HCC组织中的表达及意义
很多研究表明肝硬化增生结节内有大量c-fos的表达，有报道[1]槲皮素可降低肝纤维化小鼠肝脏的c-fos mRNA表达从而发挥抗肝纤维化的作用。本实验在肝硬化组织中也检测到c-fos蛋白的较高表达，与正常肝组织比较差异有统计学意义，提示c-fos参与了肝硬化的发病过程。
本实验HCC组织及癌旁组织中均有c-fos的过度表达，且与正常肝组织相比差异有统计学意义，提示c-fos参与了HCC的发病过程，在低分化癌中较高分化癌中15表达高，也说明其随着HCC的恶性程度而表达增多。癌旁组织c-fos蛋白表达比HCC组织稍多，这点与袁芳平[2]报道一致，可能因为c-fos是肝细胞癌变的早期事件；肝细胞癌变过程同时激活其他癌基因[3]，对c-fos的转录表达起到抑制作用；肝细胞癌变后病毒复制减少，HBV合成X多肽减少而导致c-fos转录、表达减少所致。大多研究认为c-fos基因在细胞生长静止期基本不表达，但正常肝组织存在着正常增生，这可能导致正常肝脏也有一定程度阳性表达。
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2、Sp1蛋白在LC、HCC组织中的表达及意义
Sp1是Sp/SKLF转录因子家族中最早被克隆的因子，通常认为Sp1是通过GC或GT盒调节从而控制所有基因的转录，可调控某些启动子中富含GC序列的细胞和病毒基因的转录过程，激活靶基因的表达[4]。本研究检测到Sp1蛋白在LC组织中的表达微弱，与正常组织相比差异无统计学意义，未发现Sp1与LC发生的关系。Sp1是否在肝硬化早期阶段发挥一定作用尚不清楚。
本组51例HCC组织中大多有Sp1蛋白表达，阳性细胞集中于癌细胞核内，与正常肝组织相比差异有统计学意义，提示Sp1蛋白过度表达参与了HCC的发生发展过程，Sp1蛋白表达与瘤体大小以及肿瘤分化程度、甲胎蛋白与血管内皮生长因子阴性阳性组间差异无统计学意义，有研究认为VEGF与肿瘤血管生成关系密切，TGFβ1通过依赖Sp1的转录活化刺激VEGF，但是本研究在HCC中未发现Sp1蛋白表达与VEGF的表达有显著相关性。AFP是原发性HCC较为敏感、特异的肿瘤标志，本研究中Sp1蛋白表达在AFP阴性阳性组间差异无统计学意义，Sp1蛋白表达是否可作为独立于AFP的诊断指标，有待于进一步研究。本实验发现Sp1蛋白在癌旁组织的表达与正常肝组织相比差异有统计学意义，预示着癌旁组织有发展成癌症的危险。
, 百拇医药
参考文献
[1]徐标，韩春荣.槲皮素对血吸虫肝纤维化小鼠肝组织c-fos、c-jun mRNA和转化生长因子β1表达的抑制作用[J].中草药，2006，37(3)：393-398.
[2]袁芳平，黄陪生，龚实华，等.肝细胞癌c-fos的表达及其与乙型肝炎病毒的关系[J].福建医科大学学报，1999，33(4)：365-368
[3]王洛权，阚秀，吴秉铨，等.肝炎病毒和肝癌变的分子病理学进展[J].中华病理学杂志，1995，24(6)：393-395
[4]Nakatsukasa T，Shiraishi Y，Negi S，et al.Site-specific DNA cleavage by artificial zinc finger-type nuclease with cerium-binding peptide[J].Biochem Biophys Res Commun，2005，330(1)：247-252., 百拇医药(王 俊)
【关键词】蛋白表达；肝细胞癌；转录因子
【中图分类号】R657.3+1 【文献标识码】A 【文章编号】1009-6019(2009)-0013-1
前言
肝纤维化的发生机制涉及多种细胞因子表达的改变，而基因转录水平的调控可能在其表达中起到关键作用。在长期受损的肝脏，多种转录因子参与调控细胞外基质(ECM)蛋白的生成从而进行纤维修复的过程，这种反应的持续性导致了肝纤维化。肝细胞癌(HCC)的发生发展机制复杂，涉及多基因调控多信号通路，而基因转录水平的调控可能也在其表达中起到关键作用。大量实验研究表明转录因子Sp1、c-fos在多种肿瘤中有重要的作用。转录因子Sp1、c-fos在肝硬化、肝细胞癌中尚缺乏系统研究，我们就转录因子Sp1、c-fos在肝硬化以及肝细胞癌组织中的蛋白表达进行研究并探讨其机制。
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材料和方法
1主要试剂：c-fos多克隆抗体Neomark公司EGFR多克隆抗体(兔抗) 、DAB溶液、苏木素染色试剂盒均由北京博奥森生物技术有限公司产品。
2标本收集收集2007年3月到2008年9月肝穿刺与肝细胞癌手术切除病理标本，共58例，其中肝细胞癌43例；肝硬化组织15例。另有正常供肝组织病理标本10例。入选标准：经病理检查均证实为肝硬化、肝细胞癌，免疫组化检测HBsAg均阳性；术前患者均未行化疗、放疗。
3免疫组化 ：免疫组化染色具体步骤严格按照试剂盒说明进行操作。染色结果判定标准：按细胞染色强度判为浅黄色(0分)、黄色(1分)及棕黄色(2分)3级。
4统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件包进行分析，组间采用非参数两个或多个独立样本检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
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结果
1、c-fos蛋白在正常肝组织、LC组织、癌旁组织、HCC组织中的表达情况
在43例HCC组织中，c-fos蛋白阳性表达率为83.7%(36/43)，其中弱表达和强表达者的比例分别占总病例数的58.1%(25/43)和25.6%(11/43)；35例癌旁组织中表达率为85.7%(30/35)；15例LC组织中表达率为66.7%(10/15)；10例正常肝组织中c-fos表达阳性率为30.0%(3/10)。c-fos蛋白在正常肝组织、LC组织、癌旁组织和HCC组织的表达情况。
2、Sp1蛋白在正常肝组织、LC组织、癌旁组织、HCC组织中的表达情况
在43例HCC组织中，Sp1蛋白表达阳性率为74.4%(32/43)，其中弱表达和强表达率分别为14.0%(6/43)和60.4%(26/43)；35例癌旁组织有14例(40.0%)Sp1阳性表达；15例LC组织中有2例弱阳性表达13.3%(2/15)；10例正常肝组织中Sp1蛋白表达均为阴性。
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讨论
1、c-fos蛋白在LC、HCC组织中的表达及意义
很多研究表明肝硬化增生结节内有大量c-fos的表达，有报道[1]槲皮素可降低肝纤维化小鼠肝脏的c-fos mRNA表达从而发挥抗肝纤维化的作用。本实验在肝硬化组织中也检测到c-fos蛋白的较高表达，与正常肝组织比较差异有统计学意义，提示c-fos参与了肝硬化的发病过程。
本实验HCC组织及癌旁组织中均有c-fos的过度表达，且与正常肝组织相比差异有统计学意义，提示c-fos参与了HCC的发病过程，在低分化癌中较高分化癌中15表达高，也说明其随着HCC的恶性程度而表达增多。癌旁组织c-fos蛋白表达比HCC组织稍多，这点与袁芳平[2]报道一致，可能因为c-fos是肝细胞癌变的早期事件；肝细胞癌变过程同时激活其他癌基因[3]，对c-fos的转录表达起到抑制作用；肝细胞癌变后病毒复制减少，HBV合成X多肽减少而导致c-fos转录、表达减少所致。大多研究认为c-fos基因在细胞生长静止期基本不表达，但正常肝组织存在着正常增生，这可能导致正常肝脏也有一定程度阳性表达。
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2、Sp1蛋白在LC、HCC组织中的表达及意义
Sp1是Sp/SKLF转录因子家族中最早被克隆的因子，通常认为Sp1是通过GC或GT盒调节从而控制所有基因的转录，可调控某些启动子中富含GC序列的细胞和病毒基因的转录过程，激活靶基因的表达[4]。本研究检测到Sp1蛋白在LC组织中的表达微弱，与正常组织相比差异无统计学意义，未发现Sp1与LC发生的关系。Sp1是否在肝硬化早期阶段发挥一定作用尚不清楚。
本组51例HCC组织中大多有Sp1蛋白表达，阳性细胞集中于癌细胞核内，与正常肝组织相比差异有统计学意义，提示Sp1蛋白过度表达参与了HCC的发生发展过程，Sp1蛋白表达与瘤体大小以及肿瘤分化程度、甲胎蛋白与血管内皮生长因子阴性阳性组间差异无统计学意义，有研究认为VEGF与肿瘤血管生成关系密切，TGFβ1通过依赖Sp1的转录活化刺激VEGF，但是本研究在HCC中未发现Sp1蛋白表达与VEGF的表达有显著相关性。AFP是原发性HCC较为敏感、特异的肿瘤标志，本研究中Sp1蛋白表达在AFP阴性阳性组间差异无统计学意义，Sp1蛋白表达是否可作为独立于AFP的诊断指标，有待于进一步研究。本实验发现Sp1蛋白在癌旁组织的表达与正常肝组织相比差异有统计学意义，预示着癌旁组织有发展成癌症的危险。
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参考文献
[1]徐标，韩春荣.槲皮素对血吸虫肝纤维化小鼠肝组织c-fos、c-jun mRNA和转化生长因子β1表达的抑制作用[J].中草药，2006，37(3)：393-398.
[2]袁芳平，黄陪生，龚实华，等.肝细胞癌c-fos的表达及其与乙型肝炎病毒的关系[J].福建医科大学学报，1999，33(4)：365-368
[3]王洛权，阚秀，吴秉铨，等.肝炎病毒和肝癌变的分子病理学进展[J].中华病理学杂志，1995，24(6)：393-395
[4]Nakatsukasa T，Shiraishi Y，Negi S，et al.Site-specific DNA cleavage by artificial zinc finger-type nuclease with cerium-binding peptide[J].Biochem Biophys Res Commun，2005，330(1)：247-252., 百拇医药(王 俊)