戚向阳 孟 珂 章 棋 刘合生 柳云丽 喻柯柯 陈秋平 曹少谦

    (浙江万里学院生物与环境学院 浙江宁波315100)

    Ⅱ型糖尿病是一种典型的代谢综合症，可诱发机体多种代谢异常。有研究表明，胰岛β 细胞功能受损和凋亡是糖尿病发病的主要诱因[1-3]，而糖脂毒性是损伤胰岛β 细胞功能的重要原因[4-5]。研究表明，高糖损伤胰岛β 细胞的机制之一是抑制胰岛素基因转录因子Pdx-1 的活性及其表达水平[6]。Pdx-1 在胰腺发育、胰岛β 细胞分化及维持成熟胰岛β 细胞正常功能方面起着关键作用，可调节胰岛β 细胞葡萄糖激酶基因、 葡萄糖转运子GLUT-2 的表达[7]。Pdx-1 表达受损可诱发高血糖及血脂异常[8]。动物实验[9]表明，糖尿病鼠的持续高血糖可明显抑制Pdx-1 基因和胰岛素基因表达，降低Pdx-1 转录因子与胰岛素基因启动子结合能力，降低胰岛素分泌量。此外，Pdx-1 还调控其它与胰岛素分泌相关基因的表达，影响β 细胞的葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能(GSIS)及胰岛素分泌时相的改变[10]。上调Pdx-1 蛋白表达，减弱INS-1细胞糖脂毒性，是保护胰岛β 细胞和缓解糖尿病患者症状的一种有效途径。

    目前市场上降糖药物种类繁多，可是均对人体具有一定毒副作用。有研究发现许多天然产物，尤其是多酚类化合物具有明显的降血糖作用。如茶多酚可以降低餐后高血糖，调节血脂，缓解胰岛素抵抗[11]。天竺桂提取物中的B-型多酚具有一定的降血糖活性，可保护棕榈酸或H2O2诱导损伤的INS-1 细胞。杨梅花色苷能减少H2O2诱导的胰岛INS-1 细胞的凋亡和坏死，减少细胞内过量ROS的产生，同时能减少自噬性细胞的死亡[12]。然而，有关杨梅多酚化合物对高浓度葡萄糖诱导的胰岛β 细胞凋亡和功能受损的保护作用尚未见有关文献。本文以胰岛β 细胞INS-1 细胞作为试验对象，探讨杨梅多酚提取物对高糖诱导INS-1 细胞损伤的保护作用以及对Pdx-1 转录因子表达水平的影响，为天然安全的降糖功能因子的筛选提供一定的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与主要试剂

    INS-1 细胞，上海基免实业有限公司。RPMI 1640 培养基，北京Hyclone 公司；β-巯基乙醇，美国Gibco 公司；丙酮酸钠、 葡萄糖、MTT、Hoechst 33342、吖啶橙(PI)、台盼蓝及胰蛋白酶，美国Sigma 公司；胎牛血清，北京全式金生物技术有限公司；二甲亚砜(细胞培养级)，北京索莱宝科技有限公司；青霉素-链霉素溶液 ......