朱运平 褚文丹 黎 芳 李秀婷1，*

    (1 北京食品营养与人类健康高精尖创新中心(北京工商大学) 北京100048 2 北京市食品添加剂工程技术研究中心(北京工商大学) 北京100048 3 北京工商大学食品学院 北京100048)

    葡萄糖氧化酶在自然界分布广泛，具有催化特异性强，反应效率高的优点，在食品行业、医药行业、饲料添加等方面得到广泛应用[1-3]。在食品行业，有大量研究表明葡萄糖氧化酶对面制品有良好的改良作用，如Daiva 等[4]研究了GOD 对亚洲面条流变特性的影响；Lele 等[5]研究发现包埋GOD 对商业小麦粉烘焙品质有良好的改良作用；王雨生等[6]发现葡萄糖氧化酶可以改善面包的烘焙品质。在医药行业，GOD 可用于血糖含量测定，GOD 对于β-D-葡萄糖的专一性作用，葡萄糖氧化酶被广泛应用于血糖、尿糖及尿酮体的检查等[7]。在饲料添加方面，在鸡饲料中添加GOD，能催化鸡肠道内葡萄糖产生葡萄糖酸和过氧化氢，抑制大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、弧菌，保护鸡肠道上皮细胞的完整性，改善肠道酸性消化环境，提高饲养鸡的成活率[8]。

    微生物种类繁多，生长繁殖速度快，成为生产葡萄糖氧化酶的主要力量，生产葡萄糖氧化酶的主要菌株为青霉和黑曲霉[9-10]。目前关于黑曲霉产葡萄糖氧化酶的报道已有很多，然而酶活力不理想。王志新等[11]提取的黑曲霉A9 产葡萄糖氧化酶的比活力是349.84 U/mg；中国科学院武汉病毒研究所构建的重组酵母所产GOD 比活力为426.25 U/mg[12]。舒正玉等[13]经硫酸铵沉淀、透析、DEAE Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析和Sephadex G-75 凝胶过滤层析得到电泳纯的黑曲霉F044 脂肪酶，纯化倍数为73.71 倍。本研究利用AKTA 蛋白纯化系统，采用浓缩、 盐析和层析相结合的方法，对黑曲霉菌株1504 所产葡萄糖氧化酶进行分离纯化，最终得到电泳纯的葡萄糖氧化酶，同时对其酶学性质进行研究，并将其应用于馒头品质的改良，具有重大研究价值。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    面粉：中粮雪花粉，中粮集团；活性干酵母，安琪酵母有限公司。

    丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷，美国Amresco(USA) 公司；甘氨酸，北京拜尔迪生物公司；DEAE-Sepharose Fast Flow、Sephacryl S-200，瑞典Amerham(Uppsala)公司；中分子量标准蛋白，美国Sigma 公司；聚乙二醇、硫酸铵葡萄糖、氯化钠、碳酸钙等其它化学试剂均为分析纯级 ......