张慧恩 王彩霞 杨 华*

    (1 浙江万里学院生物与环境学院 浙江宁波315100 2 宁波御坊堂生物科技有限公司 浙江宁波315100)

    新鲜度是水产品的重要评价指标，目前衡量水产品新鲜度最常用的指标是K 值。K 值是以水产品体内核苷酸在降解过程中产生的一系列化合物作为指标的鲜度判定方法[1]。活体水产品的肌肉运动和生理代谢都需要来自三磷酸腺苷(ATP)转化提供的能量，而水产品死后其体内所含的ATP在酶和微生物的共同作用下会降解为二磷酸腺苷(ADP)、腺苷酸(AMP)、肌苷酸(IMP)、次黄嘌呤核苷(HxR)和次黄嘌呤(Hx)[2]。K 值就是次黄嘌呤核苷(HxR)、次黄嘌呤(Hx)量之和与ATP 及降解产物总量的百分比[3]。K 值的大小，能反映鱼体在死亡至自溶阶段的新鲜程度，是水产品质评价的重要鲜度指标[4-5]。准确测定水产品中ATP 关联化合物对水产品的鲜度评价具有重要意义。

    目前，K 值的测定方法主要通过各种分离手段，测定样品中各ATP 关联化合物的含量。常见的分离手段有毛细管电泳法[6-7]、离子色谱法[8]、反相高效液相色谱法[9-10]等。毛细管电泳对ATP 关联化合物的分辨率较高，而仪器昂贵；离子色谱法在分离过程中分离柱需要长时间平衡，分析时间长；反相高效液相色谱法具有操作简单，仪器普及等优点，如水产行业标准SC/T3048-2014 鱼类鲜度指标K 值的测定就是用反相高效液相色谱法测定，然而传统的反相高效液相色谱法分离核苷酸种类有限，特别是对ATP 关联化合物分析测定时，往往各组分之间的分离度较低，达不到完全分离的效果。目前，也有研究在反相高效液相色谱法中引入离子对试剂以提高分离效果[11-12]，然而离子对试剂的引入极易污染色谱柱，对色谱柱损耗较大，流动相平衡时间长，特别影响分析结果的重现性。而亲水性色谱(HILIC)能够增强极性物质在色谱中保留，从而提高分离效果[13]。亲水性色谱通过强极性固定性，结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现极性化合物的分离。传统的反相色谱对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，比如固定相键合基团的脱落和反浸润。亲水性色谱对亲水性化合物有较强的保留能力，对亲水性化合物和极性化合物有广泛的选择性[14]。非常适用于分离测定ATP 关联化合物这类极性化合物。本研究利用亲水性色谱，建立了水产品中6 种ATP 关联化合物的测定方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 ......