余钰骢 姚菊明* 应铁进

    (1 浙江理工大学 杭州310018 2 浙江大学食品科学与营养系 杭州310058)

    植物多糖具有广泛的生物活性，如抗肿瘤，抗炎，抗凝血，抗病毒，抗辐射，降血糖和调节血脂[1]。灵芝多糖是一种植物多糖， 对癌症和炎症具有最强的抵抗力，可增强免疫功能。增强人体免疫功能是灵芝水溶性多糖的主要机制之一。 对于多糖的抗肿瘤活性，通常可以激活免疫系统。 因此，大量细胞因子被分泌并间接抑制。 促进体外脾细胞的增殖，增强DNA 聚合酶α 的活性，促进白细胞介素(IL)的分泌，实现其免疫功能。 抑制免疫功能间接抑制肿瘤细胞的生长和增殖， 甚至杀死肿瘤细胞[2]。 研究表明，一些灵芝多糖可以通过调节机体的免疫力，刺激免疫细胞成熟，分化和增殖，并使免疫状态从低到正常恢复。肿瘤细胞受到抑制，从而间接发挥其抗肿瘤作用[3]。

    通过前期的研究， 发现灵芝结构多糖水解物的提取温度为131 ℃，水解时间为4 h 6 min，酸浓度为0.1 mol/L， 可以得到抗氧化性和得率都较好的多糖成分[4]。 分离纯化后，得到两种多糖单体组分GLSP1 和GLSP2[5]。目前还没有关于灵芝结构多糖水解产物免疫活性的报道。 本研究从灵芝结构多糖水解物中分离纯化出两种多糖单体进行细胞免疫测定，并选择两种典型的脾细胞和巨噬细胞免疫功能模型。 探讨灵芝多糖的抗肿瘤和免疫功能。 测定的参数包括GLSP1 和GLSP2 对小鼠脾细胞的增殖率，GLSP 对腹腔巨噬细胞活性和存活率的影响， 以及对小鼠细胞产生NO 的含量的测定。 TNF-α 的影响，以及对LPS 诱导过的PM 的活性抑制作用。

    1 材料与方法

    1.1 原料

    试验材料为赤灵芝， 位于浙江龙泉市灵芝基地。

    1.2 试剂

    胎牛血清，购自四季青生物工程材料有限公司； 刀豆蛋白ConA， 购自sigma 公司(C5275)；MTT，购自碧云天生物(ST316)；0.2 μmol/L 孔径滤膜，购自millipore 公司；脂多糖LPS，sigma 公司产品(Cat.L2880-10 mg，Lot.011M4001V)；一氧化氮检测试剂盒， 购自Biyuntian Biological(Cat.S0021)；中性红试剂，购自天津凯通化学试剂有限公司(20100710)；TNF-α Elisa 试剂盒，购自联科生物技术有限公司(Cat EK2821，Lot 128230633)。

    1.3 仪器与设备 ......