龚金炎 靳羽晓 王静静 李归浦 何光华 袁海娜 李 玲刘士旺 尤玉如 肖功年*

    (1 浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室 浙江科技学院生物与化学工程学院 杭州310023 2 贝因美婴童食品股份有限公司 杭州310053)

    卵磷脂即磷脂酰胆碱(PC)是动植物细胞膜的基本组分。 长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)对生物膜和机体的正常生理活动与代谢有重要调节功能，主要包括花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等，具有良好的乳化、分散、粘着等特性[1-3]，已被广泛应用于食品、医药、保健、化妆品、饲料等行业中[4-5]。许多科研组织和权威机构包括联合国粮农组织及世卫组织建议成人从饮食中摄入的EPA 和DHA 总量应在250 mg/d～2 g/d 之间[6]。 婴儿配方食品中的总脂肪酸应该包含至少0.2% DHA 和0.35% ARA。 随着人们对保健养生的日益重视，市场上对高纯度PC 的需求逐年增加。我国高纯度PC 的生产技术水平相对落后， 特别是富含长链多不饱和脂肪酸的高纯度PC，主要靠进口，贸易逆差巨大[7]。 进一步优化PC生产工艺， 开发出富含长链多不饱和脂肪酸高纯度的PC 产品，对满足不断增长的市场需求具有重要意义。

    目前，我国PC 分离纯化方法主要有：有机溶剂萃取法、乙醇冷冻法、超临界流体法、金属盐沉淀法、膜分离法及柱色谱法等[8-10]。 国内已有学者[11-14]采用氧化铝层析柱纯化制备高纯度PC，而未对柱层析过程中的影响因素进行考察。 本试验以90%乙醇为萃取剂制备的PC 粗品为原料，结合薄层层析法和高效液相色谱对95%乙醇洗脱PC 的分离纯化工艺进行研究， 并通过气相色谱法对所得产品进行脂肪酸分析，以期为PC 的工业化生产提供技术支持。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    蛋黄卵磷脂粗品， 实验室自制 (PC 纯度为71.63%±2.73%)；蛋黄卵磷脂标准品(纯度>99%)P3556、37 种混合脂肪酸甲酯标准品、 异辛烷(AR)，sigma 公司；氯仿、无水乙醇、三乙胺、甲醇、丙酮、氢氧化钾、硫酸氢钠均为分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司；100～200 目中性氧化铝、200～300 目中性氧化铝，国药集团化学试剂有限公司；丁基羟基茴香醚，购自Aladdin (阿拉丁)；甲醇色谱纯，德国默克色谱纯试剂公司。

    1.2 仪器与设备

    层析柱(Φ2.6 cm×60 cm)，上海厦美生化科技发展有限公司；BT50S 蠕动泵 ......