边燕飞 席晓霞 郑 艺 侯强川 孙天松 孙志宏

    (内蒙古农业大学 乳品生物技术与工程教育部重点实验室农业部奶制品加工重点实验室 呼和浩特 010018)

    作为母乳不足时的替代品，婴幼儿配方奶粉在牛乳或豆乳的基础上，调整和强化蛋白质、脂肪、维生素等主要营养素，从而适合不同阶段婴幼儿生长和营养的需求。我国是世界第二大婴幼儿配方奶粉消费市场，仅2017年1月，我国进口婴幼儿配方奶粉15 091 t，价值2.16亿美元[1]。由于婴幼儿配方奶粉使用人群的特殊性，所以其质量安全监控备受关注。随着婴幼儿配方奶粉生产审查的逐渐细化，彻底杜绝了物化污染的发生，然而，原料乳营养丰富、生产工艺要求特殊，影响其质量安全的一个重要因素——微生物污染，依然存在。

    活性致病微生物是影响婴幼儿配方奶粉品质和安全的重要因素，特别是沙门氏菌和阪崎肠杆菌等，能导致新生儿脑膜炎和坏死性肠炎等疾病的发生[2-3]。虽然奶粉加工过程中的热处理工艺可将大量微生物灭活使其符合产品要求，但微生物所产生的耐热脂肪酶和蛋白酶仍具有活性，能够降低奶粉溶解度并使之产生异味[4-5]。此外，亦有研究指出许多病原性细菌在死亡裂解后会释放出大量的细菌内毒素并对机体造成潜在的危害[6-7]。防止婴幼儿配方奶粉中细菌的污染对其质量与安全至关重要。

    近年来，我国加强了对婴幼儿配方奶粉污染微生物的监管，食品安全国家标准GB 10765-2010《婴儿配方食品》[8]基于传统的细菌纯培养技术规范了婴幼儿配方奶粉中污染微生物的具体检测方法。然而此技术仅适用于检测具有活性、丰度较大且可培养的微生物，无法全面反应婴幼儿配方奶粉的微生物污染情况。目前一些分子生物学检测技术因其快速、灵敏的特点，正被广泛采用，已成为食品安全监督的有力工具。其中PacBio SMRT(Single molecule real-time)测序技术采用宏基因组学的研究策略，通过将环境样品中微生物的基因组混合作为一个整体进行研究，打破了传统微生物学基于纯培养研究的局限性。而且相比于Illumina、454焦磷酸等高通量测序技术，此技术无需进行PCR扩增，可以直接读取目标序列，在细菌种水平上揭示样品的微生物菌群结构及丰度信息[9-11]。此外，ddPCR(Droplet digital PCR)是继qPCR之后的一种新型定量技术，此技术灵敏度高、精确度高以及耐受性高，无需制备标准品即可直接获得靶分子的浓度或拷贝数，能够更加精确地对环境样品中的微生物进行绝对定量分析[12-13]。

    本研究采用PacBio SMRT测序技术 ......