刘立兵 孙晓霞 姜彦芬 王金凤 陈志敏 王建昌

    (石家庄海关技术中心 石家庄 050051)

    食源性疾病目前是全世界关注的重要公共卫生问题，无论在发达国家还是发展中国家，每年都会有数千万的人因感染食源性致病菌而发病，严重者导致死亡[1]。志贺氏菌(Shigella)作为主要的食源性致病菌之一，在我国引起感染性腹泻的致病菌中居首位。志贺氏菌属由4种革兰氏阴性、非运动性、无芽孢形成的杆状细菌组成，分别是鲍氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌[2-3]。毒力较强的志贺氏菌可以引起人类细菌性痢疾，表现出轻度痢疾、发热、腹部绞痛以及严重的体液流失[4-5]。

    传统的志贺氏菌检测主要依赖于细菌培养及一系列的生化鉴定，检测周期较长，无法实现快速检测。目前的分子生物学检测方法可以有效克服传统检测方法的部分劣势而被多数研究者所青睐，其中重组酶聚合酶扩增技术因其特异性强，灵敏性高，反应时间短，操作简便等优点而受到广泛关注，具有巨大的发展前景。RPA技术是在3种核心酶的作用下进行核酸的等温扩增。其中，重组酶与特异性引物结合后形成复合物，可移动寻找同源的双链DNA，随后发生链置换。单链DNA结合蛋白与同源DNA结合，引物与互补的DNA链结合，在链置换DNA聚合酶作用下延伸[6]。RPA基本原理是模仿体内核酸复制机制[7]，利用酶打开模板链，不需要反复热变性，在常温条件下(25～42°C)即可实现对核酸的扩增。RPA技术在检测时间上具有明显的优势，一般5～20 min内即可判定结果[8]。如果在反应中加入特异性引物探针[9]，通过荧光检测设备就可实现对目的片段扩增的实时监控。

    本研究以志贺氏菌高度保守的侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)为靶基因，建立了用于食品中志贺氏菌快速检测的real-time RPA方法。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与设备

    志贺氏菌增菌肉汤、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂等细菌培养基 ......