郭玉淅 高 贺 倪 辉 ，2，3，4 姜泽东 ，2，3，4 肖安风 ，2，3，4 朱艳冰 ，2，3，4*

    (1 集美大学食品与生物工程学院 福建厦门 361021

    2 福建省食品微生物与酶工程重点实验室 福建厦门 361021

    3 厦门市食品与生物工程技术研究中心 福建厦门 361021

    4 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室 福建厦门 361021)

    琼胶又称琼脂，是江蓠、紫菜和石花菜等红藻的细胞壁的亲水性多糖，由琼脂糖和琼脂胶组成[1]。琼脂糖是一种由D-半乳糖和3，6-内醚-α-L-半乳糖经 α(1→3)和 β(1→4)糖苷键交替连接而成的链状多糖，是形成凝胶的主要组分。琼脂胶是一种非凝胶组分，具有与琼脂糖类似的多糖链状结构，含有多种取代基，如硫酸酯、丙酮酸乙缩醛、甲基等。琼胶酶能催化水解琼脂糖分子内的糖苷键，产生琼胶寡糖。基于所催化糖苷键的类型差异，琼胶酶分为两大类：α-琼胶酶(E.C.3.2.1.158)和β-琼胶酶(E.C.3.2.1.81)，前者作用于琼脂糖的α-1，3 糖苷键，产物是以 3，6-内醚-α-L-半乳糖为还原性末端的琼寡糖；后者作用于琼脂糖的β-1，4糖苷键，产物是以D-半乳糖为还原性末端的新琼寡糖[2-3]。琼胶寡糖水溶性好，易于为人体吸收，具有多种生理功能，如抑菌、抗氧化、抗癌、美白、保湿、益生元等[4-7]。琼胶酶作为一种重要的工具酶，可以制备琼胶寡糖，用于海藻多糖结构研究，水解琼脂糖凝胶并从中回收DNA和RNA，以及制备海藻单细胞和原生质体，被广泛应用于食品、制药和日用化工等领域。

    琼胶酶主要存在于海洋微生物和一些海洋软体动物的消化道内[8]。琼脂的热溶液在43℃以下就能凝固形成凝胶[9]。琼脂溶液具有较高的黏度，其随着温度的降低逐渐增加。研究具有良好热稳定性的琼胶酶，对于琼胶的利用具有重要意义。

    在先前的研究中，从产微球茎菌AG1(Microbulbifer sp.AG1)中克隆得到琼胶酶基因[10]，它的GenBank登录号为KU049031。为获得热稳定性高的琼胶酶，本文采用理性设计方法获得琼胶酶突变体。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株 含菌株AG1琼胶酶基因的重组质粒和大肠杆菌(E.coli)BL21由实验室保存；原核表达载体pGEX-6P-1为Novagen产品 ......